western blot的作用

2016年06月03日 11:22上海邦景實(shí)業(yè)有限公司點(diǎn)擊量：1725

western blot的作用
免疫印跡是一個(gè)用于蛋白質(zhì)分析的常規(guī)技術(shù)，在電場的作用下將電泳分離的蛋白從凝膠轉(zhuǎn)移至一種固相支持物，然后利用抗原—抗體的特異性反應(yīng)，從蛋白混合物中檢測出目標(biāo)蛋白，從而定量或定性地確定正常或?qū)嶒?yàn)條件下細(xì)胞或組織中目標(biāo)蛋白的表達(dá)情況。Western blot還可用于蛋白—蛋白、蛋白—DNA和蛋白—RNA相互作用的后續(xù)分析，作為一種廉價(jià)、便捷、可靠的研究工具，將與質(zhì)譜和蛋白質(zhì)芯片等技術(shù)一起在蛋白質(zhì)組時(shí)代發(fā)揮重要作用。ELISA試劑盒
Western bloting的注意事項(xiàng)
1、為了讓實(shí)驗(yàn)更加嚴(yán)謹(jǐn)有說服力都要設(shè)計(jì)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，對(duì)照分為：陽性對(duì)照（有標(biāo)準(zhǔn)品（比如β-actin，GAPDH）或陽性血清）；陰性對(duì)照（測血時(shí)用相應(yīng)小鼠未免疫血清（即正常血）；空白對(duì)照（不加一抗，用PBS代替）；無關(guān)對(duì)照（用無關(guān)抗體）
2、一抗、二抗的濃度一般要參照抗體說明書選擇zui適當(dāng)?shù)谋壤豢苟沟倪x擇直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果以及背景
3、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)所釆用的抗原批次要一樣，盡量的避免人為的帶來個(gè)體差異。特別在做裂解液時(shí)更要注意所釆用的操作條件，盡可能的排除可變因素給實(shí)驗(yàn)帶來不確定性。
4、凝膠的質(zhì)量直接影響以后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，要特別注意幾點(diǎn)：凝膠要均一沒有氣泡；積層膠與分離膠界面要水平；AP和TEMED的量不能過多，太多會(huì)導(dǎo)致膠易脆裂；拔梳子時(shí)要快，盡量保證點(diǎn)樣孔平整。
5、電泳、轉(zhuǎn)膜時(shí)特別要注意正負(fù)極，電壓電流都不能過高；轉(zhuǎn)膜時(shí)“三明治”的疊放次序不錯(cuò)，同時(shí)要防止產(chǎn)生氣泡；盡量讓電轉(zhuǎn)溫度保持在10度以下，冰浴為宜。
6、封閉時(shí)一般在室溫下2h就夠了，但是要注意如果是*標(biāo)記的二抗就不宜用牛奶，因?yàn)榕Ｄ讨泻?，用BSA效果更好。
7、加一抗二抗要嚴(yán)格保證反應(yīng)時(shí)間，洗膜要注意盡可能地將一抗二抗洗凈，有利于降低背景；

EMR2   CD312抗體
eIF4EBP1   eIF4E結(jié)合蛋白抗體
Phospho-EGFR (Ser1045)   磷酸化表皮生長因子受體抗體
Phospho-EGFR (Tyr1138)   磷酸化表皮生長因子受體抗體
Ephrin A1 Receptor   肝配蛋白A1受體抗體
eIF2C2   真核翻譯起始因子2C2抗體
EYA2   眼睛發(fā)育缺失蛋白EYA2抗體
EYA4   EYA4蛋白抗體
ELK4   血清反應(yīng)因子輔助蛋白1抗體
ELMO2   吞噬細(xì)胞運(yùn)動(dòng)蛋白2抗體
EPB41   紅細(xì)胞膜條帶4.1蛋白抗體
phospho-EPO Receptor (Tyr485)   磷酸化紅細(xì)胞生成素受體抗體

ELISA試劑盒

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