2019年04月24日 09:40上海撫生實業有限公司點擊量：429
ELISA試劑盒的原理與操作步驟
ELISA試劑盒技術原理：
(1). 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。
(2). 結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。
(3). 酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。
(4). 受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。
(5). 此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。
(6). 加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重復性好。以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。
ELISA試劑盒注意事項：
1.不同的試劑盒因工藝和操作方法略有不同，務必按照所用試劑盒嚴格操作，否則容易產生檢測結果的不確定性.
2.若不同批號ELISA試劑盒的不同組分(A液或酶工作液)，或不同試劑的不同組分進行交叉使用，有可能出現顯色淺或本底高，花板等情形。
3.反應時間的誤差，做大量標本時，*孔和zui后一孔以及一些特殊標本可能影響較大。
4.臨界值附近標本波動為正?，F象，任何試劑均不可避免?？梢钥紤]將標本做奇數次復檢。
5.加樣時樣品量誤差，對于陰或很陽的標本影響不大，但對閾值附近的標本影響極大，建議校對加樣器。
ELISA檢測試劑盒操作步驟：
1、加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50l，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40l，然后再加待測樣品10l（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
2、溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
3、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
4、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此
重復5次，拍干。
5、加酶：每孔加入酶標試劑50l，空白孔除外。
6、顯色：每孔先加入顯色劑A50l，再加入顯色劑B50l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10 分鐘.
7、終止：每孔加終止液50l，終止反應(此時藍色立轉黃色)。
8、測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
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