PEI實(shí)驗(yàn)使用注意事項(xiàng)

2020年03月03日 11:29上海撫生實(shí)業(yè)有限公司點(diǎn)擊量：883

PEI實(shí)驗(yàn)使用注意事項(xiàng)

質(zhì)粒質(zhì)量：請(qǐng)務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級(jí)無內(nèi)毒素質(zhì)粒。通過260 nm光吸收測定DNA 濃度，260nm / 280nm比值確定 DNA 純度（比值應(yīng)該在1.8～2.0的范圍之內(nèi)）。如有可能，請(qǐng)通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。

細(xì)胞條件：使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保培養(yǎng)基沒有被細(xì)菌、真菌或支原體污染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞，請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者李記生物的胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞。

特別提醒

1. 對(duì)于某些類型的細(xì)胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，可適當(dāng)降低鋪板密度，以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為70～80%。

2. 對(duì)于接觸抑制敏感的細(xì)胞，可適當(dāng)降低鋪板密度。

3. 即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞，但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。

4. PEI對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來而言，每 1μg DNA 使用 3.0 μL EZ Trans試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每 1 μg DNA使用 1～4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。

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