
2021年06月28日 00:53合肥萊爾生物科技有限公司點擊量:373
注意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
規格:100T/96S
產品內容:
試劑一:液體 34mL×1 瓶,4℃保存。每次用完用封口膜密封保存。
試劑二:液體 30mL×1 瓶,4℃保存。
標準品:粉劑×1 支,50mg 木質素,4℃保存。臨用前加入 1mL 高氯酸,充分混勻溶解,配成50mg/mL 的標準液。
產品說明:
木質素是構成植物細胞壁的成分之一,具有使細胞相連的作用。木質素存在于木質組織中,主要作用是通過形成交織網來硬化細胞壁,為次生壁主要成分。
木質素中的酚羥基發生乙酰化后在 280nm 處有特征吸收峰,280nm 的吸光值高低與木質素含量正相關。
試驗中所需的儀器和試劑:
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、可調式移液槍、研缽/勻漿器、EP 管、封口膜、高氯酸、冰乙酸和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣品處理:樣品 80℃烘干至恒重,粉碎,過 40 目篩,稱取約 3mg 于 1.5mLEP 管中。二、測定步驟:
1、分光光度計/酶標儀預熱 30min 以上,調節波長至 280nm,冰乙酸調零。
2、操作表:在 1.5ml玻璃管中依次加入下列試劑:
| 測定管 | 標準管 | 空白管 |
樣品(mg) | 3 | - | - |
試劑一(µL) | 300 | 300 | 300 |
高氯酸(µL) | 12 | - | 12 |
標準液(µL) | - | 12 | - |
封口膜密封,充分混勻。于 80℃水浴鍋水浴 40min,進行乙酰化。每隔 10min 震蕩一次, 然后自然冷卻。 | |||
試劑二(µL) | 300 | 300 | 300 |
充分混勻后于常溫 8000g 離心 10min,取上清。 | |||
上清液(µL) | 12 | 12 | 12 |
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三、木質素含量計算:
C 標準=C 原液×V 標準÷V 乙酰化×V 上清÷V 檢測=0.0196 mg/mL
木質素(mg/g)= △A÷(△A 標準÷C 標準)×V 檢測÷(W×V 上清÷V 乙酰化)
= 0.5998×△A÷△A 標準÷W
C 標準:標準液在最終檢測體系中的濃度,0.0196 mg/mL;C 原液:標準液濃度,50mg/mL;V 標準:加入的標準液的體積,0.012mL;V 乙酰化:乙酰化反應體積,0.612mL;V 上清:上清液體積,0.012mL;V 檢測:檢測反應總體積,0.6mL;W:樣本質量,g。1、試劑一有毒性,請操作時
注意事項:
1、做好防護措施,加熱前必須用封口膜密封,以防氣體溢出。
2、加熱過程中有劇烈反應,震蕩時輕搖,以免壓力過大噴出造成人身傷害。
3、冰乙酸具有強刺激性,建議操作過程全部在通風櫥內操作。
4、取上清加冰乙酸步驟根據自己樣品乙酰化程度,冰乙酸的用量可調整,保證吸光值在 0.1-0.8 之間即可,并在公式中參與計算。
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