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甜菜堿含量檢測試劑盒說明書

2021年07月12日 17:01合肥萊爾生物科技有限公司點擊量：480

注意：正式測定之前選擇 2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：80%甲醇，自備。取 40mL 甲醇，加 10mL 蒸餾水。

試劑一：粉劑 0.4g×5 瓶，4℃保存，臨用前根據(jù)用量配制，每瓶加 15mL 蒸餾水，用濃鹽酸調(diào)pH 為 1，攪拌 45min，過濾后用水定容至 20mL。

試劑二：yi醚，自備。

試劑三：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：粉劑×1 瓶，常溫保存。

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 瓶，臨用前加入 3mL 蒸餾水，即得 10mg/mL 甜菜堿標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說明：

甜菜堿是一種廣泛分布于動植物及微生物體內(nèi)的季銨型水溶性生物堿，是生物體內(nèi)膽堿的氧化產(chǎn)物，可以增強免疫力、降血脂、抗氧化、抗腫瘤，并可作為甲基供體，參與促進動物蛋白質(zhì)和脂肪代謝、增進食欲、緩和應(yīng)激、調(diào)節(jié)滲透壓、穩(wěn)定維生素等多種生物作用，在化工、醫(yī)藥、食品添加劑等領(lǐng)域有較廣泛的應(yīng)用。

甜菜堿在強酸條件下和雷氏鹽發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生沉淀，沉淀用丙酮溶解形成紅色溶液，在 525nm 處有特征吸收峰，測定 525nm 處的吸光值，可得樣品的甜菜堿含量。

自備實驗用品及儀器

臺式離心機、可見分光光度計、水浴鍋、1mL 玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、甲醇、yi醚、鹽酸、蒸餾水。

操作步驟

一、樣本提取：

取烘干后過 40 目篩的樣品約 0.2g，加 1mL 提取液，置于 60℃提取 30min，期間不斷震蕩。用鑷子加入約 3mg 試劑四后充分震蕩，10000rpm，25℃，離心 15min，取上清液，于 70℃揮發(fā)甲醇(大約剩余 0.2mL，務(wù)必將甲醇揮發(fā)干凈)，之后用水定容至 1mL。

二、測定操作表

1、 可見分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 525nm，試劑三調(diào)零。

2、 將 10mg/mL 甜菜堿標(biāo)準(zhǔn)液依次稀釋為 9、8、7、6、5、4、3、2 mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

3、 操作表：

試劑名稱（mL）

測定管

標(biāo)準(zhǔn)管

空白管

樣本

0.1

-

-

標(biāo)準(zhǔn)品

-

0.1

-

蒸餾水

-

-

0.1

試劑一

1

1

1

充分混勻，4℃中反應(yīng) 2h，8000rpm，25℃，離心 15min，棄上清

試劑二

1

1

1

8000rpm，25℃，離心 10min，棄上清。置于通風(fēng)櫥使試劑二自然揮發(fā)干凈

試劑三

1

1

1

震蕩使沉淀充分溶解，測定 A 標(biāo)準(zhǔn)管、A 測定管和 A 空白管，計算ΔA 標(biāo)準(zhǔn)

=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管， ΔA 測定=A 測定管-A 空白管。

三、 甜菜堿含量計算公式

1、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：

以ΔA 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為 x 軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b，將ΔA 測定帶入方程，得到 x（mg/mL）

2、甜菜堿含量的計算：

甜菜堿含量（mg/g）=x×V 提取÷W。

V 提取：提取液體積，1mL；W：樣本烘干質(zhì)量，g。

注意事項

1、試劑一配制時 pH 嚴(yán)格控制為 1，否則會導(dǎo)致反應(yīng)不*，配制后 4℃只能穩(wěn)定 48 小時，配制后盡快使用。

2、試劑二與試劑三對呼吸道有一定的刺激，請做好防護工作。

3、當(dāng)ΔA 大于 0.4 時，建議將樣本稀釋后測定。

4、本試劑盒檢測范圍在：2mg/mL-9mg/mL 之間。

 

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