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2021年07月12日 17:01合肥萊爾生物科技有限公司點擊量:480
注意:正式測定之前選擇 2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
規(guī)格:50T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容:
提取液:80%甲醇,自備。取 40mL 甲醇,加 10mL 蒸餾水。
試劑一:粉劑 0.4g×5 瓶,4℃保存,臨用前根據(jù)用量配制,每瓶加 15mL 蒸餾水,用濃鹽酸調(diào)pH 為 1,攪拌 45min,過濾后用水定容至 20mL。
試劑二:yi醚,自備。
試劑三:液體 100mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:粉劑×1 瓶,常溫保存。
標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1 瓶,臨用前加入 3mL 蒸餾水,即得 10mg/mL 甜菜堿標(biāo)準(zhǔn)液。
產(chǎn)品說明:
甜菜堿是一種廣泛分布于動植物及微生物體內(nèi)的季銨型水溶性生物堿,是生物體內(nèi)膽堿的氧化產(chǎn)物,可以增強免疫力、降血脂、抗氧化、抗腫瘤,并可作為甲基供體,參與促進動物蛋白質(zhì)和脂肪代謝、增進食欲、緩和應(yīng)激、調(diào)節(jié)滲透壓、穩(wěn)定維生素等多種生物作用,在化工、醫(yī)藥、食品添加劑等領(lǐng)域有較廣泛的應(yīng)用。
甜菜堿在強酸條件下和雷氏鹽發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生沉淀,沉淀用丙酮溶解形成紅色溶液,在 525nm 處有特征吸收峰,測定 525nm 處的吸光值,可得樣品的甜菜堿含量。
自備實驗用品及儀器
臺式離心機、可見分光光度計、水浴鍋、1mL 玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、甲醇、yi醚、鹽酸、蒸餾水。
操作步驟
一、樣本提取:
取烘干后過 40 目篩的樣品約 0.2g,加 1mL 提取液,置于 60℃提取 30min,期間不斷震蕩。用鑷子加入約 3mg 試劑四后充分震蕩,10000rpm,25℃,離心 15min,取上清液,于 70℃揮發(fā)甲醇(大約剩余 0.2mL,務(wù)必將甲醇揮發(fā)干凈),之后用水定容至 1mL。
二、測定操作表
1、 可見分光光度計預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 525nm,試劑三調(diào)零。
2、 將 10mg/mL 甜菜堿標(biāo)準(zhǔn)液依次稀釋為 9、8、7、6、5、4、3、2 mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
3、 操作表:
試劑名稱(mL) | 測定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
樣本 | 0.1 | - | - |
標(biāo)準(zhǔn)品 | - | 0.1 | - |
蒸餾水 | - | - | 0.1 |
試劑一 | 1 | 1 | 1 |
充分混勻,4℃中反應(yīng) 2h,8000rpm,25℃,離心 15min,棄上清 | |||
試劑二 | 1 | 1 | 1 |
8000rpm,25℃,離心 10min,棄上清。置于通風(fēng)櫥使試劑二自然揮發(fā)干凈 | |||
試劑三 | 1 | 1 | 1 |
震蕩使沉淀充分溶解,測定 A 標(biāo)準(zhǔn)管、A 測定管和 A 空白管,計算ΔA 標(biāo)準(zhǔn) =A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管, ΔA 測定=A 測定管-A 空白管。 |
三、 甜菜堿含量計算公式
1、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:
以ΔA 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸,標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為 x 軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b,將ΔA 測定帶入方程,得到 x(mg/mL)
2、甜菜堿含量的計算:
甜菜堿含量(mg/g)=x×V 提取÷W。
V 提取:提取液體積,1mL;W:樣本烘干質(zhì)量,g。
注意事項
1、試劑一配制時 pH 嚴(yán)格控制為 1,否則會導(dǎo)致反應(yīng)不*,配制后 4℃只能穩(wěn)定 48 小時,配制后盡快使用。
2、試劑二與試劑三對呼吸道有一定的刺激,請做好防護工作。
3、當(dāng)ΔA 大于 0.4 時,建議將樣本稀釋后測定。
4、本試劑盒檢測范圍在:2mg/mL-9mg/mL 之間。
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