2021年07月12日 17:01合肥萊爾生物科技有限公司點擊量：477
注意：正式測定之前選擇 2-3個預期差異大的樣本做預測定。
規格：50T/48S
產品內容：
提取液：80%甲醇，自備。取 40mL 甲醇，加 10mL 蒸餾水。
試劑一：粉劑 0.4g×5 瓶，4℃保存，臨用前根據用量配制，每瓶加 15mL 蒸餾水，用濃鹽酸調pH 為 1，攪拌 45min，過濾后用水定容至 20mL。
試劑二：yi醚，自備。
試劑三：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：粉劑×1 瓶，常溫保存。
標準品：粉劑×1 瓶，臨用前加入 3mL 蒸餾水，即得 10mg/mL 甜菜堿標準液。
產品說明：
甜菜堿是一種廣泛分布于動植物及微生物體內的季銨型水溶性生物堿，是生物體內膽堿的氧化產物，可以增強免疫力、降血脂、抗氧化、抗腫瘤，并可作為甲基供體，參與促進動物蛋白質和脂肪代謝、增進食欲、緩和應激、調節滲透壓、穩定維生素等多種生物作用，在化工、醫藥、食品添加劑等領域有較廣泛的應用。
甜菜堿在強酸條件下和雷氏鹽發生反應產生沉淀，沉淀用丙酮溶解形成紅色溶液，在 525nm 處有特征吸收峰，測定 525nm 處的吸光值，可得樣品的甜菜堿含量。
自備實驗用品及儀器
臺式離心機、可見分光光度計、水浴鍋、1mL 玻璃比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器、甲醇、yi醚、鹽酸、蒸餾水。
操作步驟
一、樣本提取：
取烘干后過 40 目篩的樣品約 0.2g，加 1mL 提取液，置于 60℃提取 30min，期間不斷震蕩。用鑷子加入約 3mg 試劑四后充分震蕩，10000rpm，25℃，離心 15min，取上清液，于 70℃揮發甲醇(大約剩余 0.2mL，務必將甲醇揮發干凈)，之后用水定容至 1mL。
二、測定操作表
1、 可見分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 525nm，試劑三調零。
2、 將 10mg/mL 甜菜堿標準液依次稀釋為 9、8、7、6、5、4、3、2 mg/mL 的標準溶液備用。
3、 操作表：
| 試劑名稱（mL） | 測定管 | 標準管 | 空白管 |
| 樣本 | 0.1 | - | - |
| 標準品 | - | 0.1 | - |
| 蒸餾水 | - | - | 0.1 |
| 試劑一 | 1 | 1 | 1 |
| 充分混勻，4℃中反應 2h，8000rpm，25℃，離心 15min，棄上清 | |||
| 試劑二 | 1 | 1 | 1 |
| 8000rpm，25℃，離心 10min，棄上清。置于通風櫥使試劑二自然揮發干凈 | |||
| 試劑三 | 1 | 1 | 1 |
| 震蕩使沉淀充分溶解，測定 A 標準管、A 測定管和 A 空白管，計算ΔA 標準 =A 標準管-A 空白管， ΔA 測定=A 測定管-A 空白管。 | |||
三、 甜菜堿含量計算公式
1、繪制標準曲線：
以ΔA 標準為 y 軸，標準溶液濃度為 x 軸，繪制標準曲線，得到標準方程 y=kx+b，將ΔA 測定帶入方程，得到 x（mg/mL）
2、甜菜堿含量的計算：
甜菜堿含量（mg/g）=x×V 提取÷W。
V 提取：提取液體積，1mL；W：樣本烘干質量，g。
注意事項
1、試劑一配制時 pH 嚴格控制為 1，否則會導致反應不*，配制后 4℃只能穩定 48 小時，配制后盡快使用。
2、試劑二與試劑三對呼吸道有一定的刺激，請做好防護工作。
3、當ΔA 大于 0.4 時，建議將樣本稀釋后測定。
4、本試劑盒檢測范圍在：2mg/mL-9mg/mL 之間。
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