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2021年07月20日 16:08合肥萊爾生物科技有限公司點(diǎn)擊量:313
FDA水解酶試劑盒說明書微量法
注意:正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
FDA 水解反應(yīng)能很好的反應(yīng)土壤中微生物活性和土壤質(zhì)量的變化以及生態(tài)系統(tǒng)中有機(jī)質(zhì)的轉(zhuǎn)化,是土壤質(zhì)量研究中的重要生物學(xué)指標(biāo)之一。
測(cè)定原理:
FDA 是一種無色化合物,在介質(zhì)中能被許多土壤酶所催化水解,并經(jīng)脫水反應(yīng),產(chǎn)生酶解終產(chǎn)物熒光素,穩(wěn)定不易被分解,并在 490nm 處有強(qiáng)吸收峰,通過檢測(cè) 490nm 處的吸光值變化可計(jì)算得 FDA 水解酶活性。
FDA水解酶試劑盒說明書自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制:
標(biāo)準(zhǔn)液:液體 4mL×1 瓶,4℃避光保存。試劑一:液體 40mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1 瓶,-20℃避光保存,臨用前加 4mL 試劑三溶解。試劑三:液體 40mL×1 瓶,4℃保存。
樣本處理:
稱取風(fēng)干過 30-50 目篩土壤約 0.1g,備用。
FDA水解酶試劑盒說明書測(cè)定操作表:
空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 對(duì)照管 | 測(cè)定管 | |
樣本(g) | 0.05 | 0.05 | ||
標(biāo)準(zhǔn)液 (μ L) | 40 | |||
雙蒸水 (μ L) | 40 | |||
試劑一 (μ L) | 200 | 200 | 240 | 200 |
試劑二 (μ L) | 40 | |||
充分混勻,30℃,震蕩 1h | ||||
試劑三 (μ L) | 160 | 160 | 160 | 160 |
10000g,25℃,離心 5min,取 200μ L 上清于微量石英比色皿/96 孔板中測(cè)定 490nm 處吸光值A(chǔ),△A1=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管,△A2=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管 |
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
FDA水解酶試劑盒說明書酶活性計(jì)算公式:
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
酶活性定義:每克土壤每天產(chǎn)生 1μ mol 熒光素的量為一個(gè)酶活力單位。FDA 活性(μ mol/d/g)=(△A2÷△A1×C 標(biāo)準(zhǔn)品)×V 反總÷W
= 2.4×(△A2÷△A1)÷W
b. 用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
酶活性定義:每克土壤每天產(chǎn)生 1μ mol 熒光素的量為一個(gè)酶活力單位。FDA 活性(μ mol/d/g)=(△A2÷△A1×C 標(biāo)準(zhǔn)品)×V 反總÷W
= 2.4×(△A2÷△A1)÷W
C 標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品濃度 100μ mol/L;V 反總:反應(yīng)總體積,0.4mL;W:樣本質(zhì)量,g
注意事項(xiàng):
1. 盡量采用新鮮土樣或者短期低溫保存樣品,否則很難準(zhǔn)確反映酶的活性。
2. 測(cè)定之前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),若吸光值較高,請(qǐng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y(cè)定,并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
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