FDA水解酶試劑盒說明書

2021年07月20日 16:08合肥萊爾生物科技有限公司點擊量：313

FDA水解酶試劑盒說明書微量法

注意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

FDA 水解反應能很好的反應土壤中微生物活性和土壤質(zhì)量的變化以及生態(tài)系統(tǒng)中有機質(zhì)的轉(zhuǎn)化，是土壤質(zhì)量研究中的重要生物學指標之一。

測定原理：

FDA 是一種無色化合物，在介質(zhì)中能被許多土壤酶所催化水解，并經(jīng)脫水反應，產(chǎn)生酶解終產(chǎn)物熒光素，穩(wěn)定不易被分解，并在 490nm 處有強吸收峰，通過檢測 490nm 處的吸光值變化可計算得 FDA 水解酶活性。

FDA水解酶試劑盒說明書自備實驗用品及儀器：

天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配制：

標準液：液體 4mL×1 瓶，4℃避光保存。試劑一：液體 40mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存，臨用前加 4mL 試劑三溶解。試劑三：液體 40mL×1 瓶，4℃保存。

樣本處理：

稱取風干過 30-50 目篩土壤約 0.1g，備用。

FDA水解酶試劑盒說明書測定操作表：

	空白管	標準管	對照管	測定管
樣本（g）			0.05	0.05
標準液（μ L）		40
雙蒸水（μ L）	40
試劑一（μ L）	200	200	240	200
試劑二（μ L）				40
充分混勻，30℃，震蕩 1h
試劑三（μ L）	160	160	160	160
10000g，25℃，離心 5min，取 200μ L 上清于微量石英比色皿/96 孔板中測定 490nm 處吸光值A，△A1=A 標準管-A 空白管，△A2=A 測定管-A 對照管

注意：空白管和標準管只需測定一次。

FDA水解酶試劑盒說明書酶活性計算公式：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

酶活性定義：每克土壤每天產(chǎn)生 1μ mol 熒光素的量為一個酶活力單位。FDA 活性（μ mol/d/g）=（△A2÷△A1×C 標準品）×V 反總÷W

= 2.4×（△A2÷△A1）÷W

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

酶活性定義：每克土壤每天產(chǎn)生 1μ mol 熒光素的量為一個酶活力單位。FDA 活性（μ mol/d/g）=（△A2÷△A1×C 標準品）×V 反總÷W

= 2.4×（△A2÷△A1）÷W

C 標準品：標準品濃度 100μ mol/L；V 反總：反應總體積，0.4mL；W：樣本質(zhì)量，g

注意事項：

1. 盡量采用新鮮土樣或者短期低溫保存樣品，否則很難準確反映酶的活性。

2. 測定之前進行預實驗，若吸光值較高，請進行適當?shù)南♂屧贉y定，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

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