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TRITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽注意事項(xiàng)和操作流程

2021年12月21日 16:49上海懋康生物科技有限公司點(diǎn)擊量：793

 Phalloidin 鬼筆環(huán)肽；F-actin 肌動(dòng)蛋白（聚合）；G-actin 球形肌動(dòng)蛋白（單體）；Actin Polymerization 肌動(dòng)蛋白聚合；Cytochalasin細(xì)胞松弛素；CAS NO.：17466-45-4； 

產(chǎn)品信息

 

產(chǎn)品名稱(chēng)

 

產(chǎn)品編號(hào)

 

規(guī)格

 

價(jià)格（元）

 

TRITC Phalloidin TRITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

MX4405-300T

300T

568

 

TRITC Phalloidin (Powder) TRITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

MX4406-1MG

1mg

4128

【溫馨提示】：見(jiàn)我司整理的鬼筆環(huán)肽及衍生物（Phalloidin and Phalloidin Conjugates）產(chǎn)品專(zhuān)題。

 

 

產(chǎn)品描述

 

鬼筆環(huán)肽（Phalloidin），又稱(chēng)鬼筆鵝膏素，zui初是從毒蘑菇鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）中分離到的一種七肽毒素，以*的親和力和特異性結(jié)合肌動(dòng)蛋白絲F-actin（聚合形式的肌動(dòng)蛋白），不會(huì)結(jié)合單體肌動(dòng)蛋白（G-actin）。不像肌動(dòng)蛋白抗體，同時(shí)識(shí)別單體和聚合形式的肌動(dòng)蛋白。鬼筆環(huán)肽對(duì)大小纖維的親和力相近，在許多不同的動(dòng)植物物種的肌肉和非肌肉細(xì)胞中，基本都按照一個(gè)肌動(dòng)蛋白亞基與一個(gè)鬼筆環(huán)肽分子的化學(xué)計(jì)量比結(jié)合。不像肌動(dòng)蛋白抗體，對(duì)不同物種或來(lái)源的肌動(dòng)蛋白親和力會(huì)發(fā)生明顯變化。鬼筆環(huán)肽的非特異性結(jié)合幾乎可忽略，染色和未染色區(qū)域的差異極其明顯。鬼筆環(huán)肽使得肌動(dòng)蛋白聚合/解離的臨界濃度降至1μg/ml，可用作一種聚合增強(qiáng)劑。另外，產(chǎn)生的復(fù)合物高度穩(wěn)定（解離常數(shù)約3×10–8 M），能夠抑制細(xì)胞松弛素、KI和溫度上升引起的去聚合和去組裝活性。 

鬼筆環(huán)肽及其衍生物在納摩爾濃度即可對(duì)F-actin染色，且水溶性良好，是非常實(shí)用和方便的探針，對(duì)組織切片、細(xì)胞培養(yǎng)物或無(wú)細(xì)胞體系內(nèi)的F-actin進(jìn)行定性和定量研究。另外，鬼筆環(huán)肽及其衍生物很小，直徑約12–15 Å，分子量<2000 Da，經(jīng)標(biāo)記后的F-actin仍維持許多標(biāo)記前的功能。比如，標(biāo)記的甘油抽提肌纖維仍能收縮；標(biāo)記的肌動(dòng)蛋白絲仍能在固相肌球蛋白基質(zhì)中移動(dòng)。

 

本品為TRITC熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽（TRITC-Phalloidin），以溶于甲醇的20µM儲(chǔ)存液形式提供，具體的工作濃度請(qǐng)參考文獻(xiàn)或自身實(shí)驗(yàn)體系來(lái)調(diào)整，常用濃度范圍80-200nM。按照100nM的工作濃度來(lái)算，可進(jìn)行300次細(xì)胞染色。

 

 

產(chǎn)品應(yīng)用 

1）對(duì)固定的組織切片和組織細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行肌動(dòng)蛋白絲（F-actin）的熒光染色； 

2）體外制備穩(wěn)定的熒光肌動(dòng)蛋白絲（F-actin）；

 

 

注意事項(xiàng) 

1）本品（Cat# MX4405）以溶于甲醇的儲(chǔ)存液（20µM）形式提供，300T包裝，適合用量少的研究者；另提供凍干粉形式（Cat# MX4406），1mg包裝，相對(duì)更經(jīng)濟(jì)，適合用量多的研究者； 

2）本品具有一定的毒性，LD50=2mg/kg，操作時(shí)請(qǐng)注意防護(hù)。 

3）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 

操作流程（免疫熒光染色）【詳見(jiàn)懋康整理】 

 

有幾種方法都能用來(lái)染色組織細(xì)胞培養(yǎng)物內(nèi)的肌動(dòng)蛋白絲（F-actin）染色，其中，固定步驟在獲得可信且具代表性的細(xì)胞F-actin分布情況中至關(guān)重要。固定步驟基于實(shí)驗(yàn)自身需求來(lái)選擇。多聚甲醛或戊二醛都能得到優(yōu)秀的F-actin染色和良好的板狀偽足維持保存。 

一、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備 

二、染色工作液準(zhǔn)備

三、染色流程

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