古朵分享：HEPES緩沖液的配制和使用方法

2023年04月20日 14:38上海古朵生物科技有限公司點擊量：1371

　　在細胞培養(yǎng)過程中，經(jīng)常少不了HEPES緩沖液。那么，HEPES緩沖液的配制和使用方法怎樣呢?古朵技術(shù)小編為您詳細介紹.

　　HEPES緩沖液是一種弱勢，在開放式的培養(yǎng)條件中，若加入HEPES，可防止培養(yǎng)基內(nèi)pH氧化升高，從而將PH維持在7.0左右 HEPES常用于生物緩沖劑，pH值緩沖范圍：6.8-8.2，用在生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。

　　在細胞培養(yǎng)過程中，經(jīng)常少不了HEPES緩沖液。那么，HEPES緩沖液的配制和使用方法怎樣呢?HEPES緩沖液是一種弱勢，在開放式的培養(yǎng)條件中，若加入HEPES，可防止培養(yǎng)基內(nèi)pH氧化升高，從而將PH維持在7.0左右。

　　HEPES分子量為238.31，化學名：4-q乙基gua--嗪乙磺酸，分子式: C8H18N2O4S。

　　HEPES常用于生物緩沖劑，pH值緩沖范圍：6.8-8.2，用在生化診斷試劑盒、DNA/rna提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。對細胞無毒性作用。它是一種氫離子緩沖劑，能較長時間控制恒定的pH范圍。使用終濃度為10-50mmol/L。

　　HEPES使用方法有兩種：

　　(1)HEPES可按所需的濃度直接加入到配制的培養(yǎng)液中，再過濾除菌。每1000ml培養(yǎng)液中加入2.38克HEPES，待溶后用lN NaOH 調(diào)pH至7.2，濾過除菌后使用。此時HEPES的使用濃度為10 mmol/L。

　　(2)亦可配成 100 x 貯存液(l mol/L)，使用前取 99ml培養(yǎng)液加入 lml貯存液，終應(yīng)用濃度仍為10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES貯存液配制方法：取23.8g HEPES溶于90ml雙蒸水中，用lN NaOH調(diào)pH至7.5一8.0，然后用水定容至100ml，過濾除菌，分裝小瓶(2ml/瓶)，4℃或-20℃保存。

　　關(guān)于HEPES 緩沖溶液的配制，不同的文獻資料有不同的說法。根據(jù)用途，一種是單純的HEPES+NaOH，另一種是HEPES+鹽。各種配制方法總結(jié)如下：

　　一、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制

　　119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸餾水中，加0.5~1M 的NaOH水溶液調(diào)節(jié)至少所需pH(HEPES的有效pH 范圍是6.8~8.2)，然后用蒸餾水定容至500ml，于4攝氏度保存。

　　二、加少量鹽的HEPES Buffer配方(500ml)

　　HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液調(diào)節(jié)pH值，后定容。

　　三、2×HEPES緩沖鹽溶液的配制

　　將1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸餾水，用0.5M NaOH調(diào)節(jié)至所需pH值，再用蒸餾水定容至100ml即可。

　　需要注意的是，HEPES緩沖液的使用終濃度為10-50mmol/L，對細胞無毒性作用。一般情況下，濃度為20mmol/L的HEPES即可達到緩沖能力。現(xiàn)在市售HEPES為約10g包裝的小瓶，大家根據(jù)實際情況正確靈活配制就OK了。

　　HEPES緩沖液上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。

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