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細(xì)胞被支原體污染清除方法

2023年04月23日 13:20上海邦景實(shí)業(yè)有限公司點(diǎn)擊量：684

支原體污染細(xì)胞后，必須要清除支原體，常用方法有：

1、對(duì)于非重要的細(xì)胞，如培養(yǎng)中的細(xì)胞、WCB的細(xì)胞等，將培養(yǎng)物與用過的培養(yǎng)基滅活后丟棄即可。對(duì)于較為重要的細(xì)胞，如來源珍貴或?qū)嶒?yàn)室中細(xì)胞保藏量較小等可以采用以下（2）-（8）的方法。

2、用MRA處理：用支原體清除劑（Mycoplasma Removal Agent）處理細(xì)胞，作用濃度為 25μg/ml，兩周可以清除支原體。

3、用清洗純化法清除支原體污染的方法：細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)馴化→優(yōu)質(zhì)細(xì)胞群的篩選→細(xì)胞清洗→反復(fù)離心洗滌，其原理是利用離心力、細(xì)胞、微生物質(zhì)量和懸液的浮力差達(dá)到清除支原體的目的。由于支原體個(gè)體小且除發(fā)酵支原體外多為細(xì)胞外寄生,所以通過反復(fù)洗滌細(xì)胞和低速離心換液使其中潛在的支原體數(shù)量降低至ji 限. 如結(jié)合敏感抗生素的抑殺作用，可達(dá)到更好的效果。

4、藥物輔助加溫處理：先用藥物處理后，再將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時(shí)，可殺死支原體，但對(duì)細(xì)胞有不良影響。

5、使用支原體特異性血清：用5%的兔支原體免疫血清可去除支原體污染，因特異抗體可抑制支原體生長(zhǎng)，故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性，并且5個(gè)月后仍為陰性。

6、動(dòng)物體內(nèi)接種除菌法：把受支原體污染的腫瘤細(xì)胞接種在同種動(dòng)物皮下或腹腔中，借動(dòng)物免疫系統(tǒng)消滅支原體，而腫瘤細(xì)胞卻能在體內(nèi)繼續(xù)生長(zhǎng)，待一定時(shí)間后，從體內(nèi)取出細(xì)胞再進(jìn)行培養(yǎng)繁殖。

7、巨噬細(xì)胞吞噬法：從動(dòng)物腹腔采取巨噬細(xì)胞，為排除其它細(xì)胞成分，可先進(jìn)行純化，然后再加入被支原體污染的細(xì)胞培養(yǎng)液中混合培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中，為檢查支原體是否已被消除干凈，可利用支持物培養(yǎng)法驗(yàn)證，取出支持物逐日染色、鏡檢觀察，至支原體已被消除干凈為止。

8、使用支原體清除培養(yǎng)基，每2~3天更換1次新鮮培養(yǎng)液，換液時(shí)用無菌的平衡鹽溶ye洗滌細(xì)胞1~2次；期間如果細(xì)胞密度過大，請(qǐng)保持細(xì)胞密度適當(dāng)（貼壁細(xì)胞可能需要用yi 酶消化），并更換新的培養(yǎng)器皿，3天之后，即可見明顯清除效果；處理15天后，可以用支原體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)支原體是否殺滅*；如果仍有支原體殘留，可以考慮再處理6天；為避免細(xì)胞再次受到“支原體"的污染，以后每隔1個(gè)月進(jìn)行支原體的常規(guī)檢測(cè)，以保證沒有新的支原體污染。

注：支原體污染時(shí)細(xì)胞表現(xiàn)為長(zhǎng)得不好，也不死亡，同時(shí)，培養(yǎng)基又是清亮的，時(shí)間長(zhǎng)達(dá)一周也沒有什么變化，這時(shí)基本上可以判斷出是支原體污染了。



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