2023年08月29日 15:30上海古朵生物科技有限公司點擊量：316
干貨分享：ELISA固體樣本處理方法
固體樣本處理原則：稱取1g的固體樣本，用9g的合適緩沖液溶解，分泌蛋白可以直接離心取上清檢測，細胞內的蛋白，要先收集細胞，再用合適方法破碎，離心取上清測試。
1、組織標本：切割標本后，稱取1g組織，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，仔細收集上清。分裝一份待檢測，其余冷凍備用，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。對于植物組織，不好勻漿的話，就用液氮研磨，將植物組織放在研缽中，加入適量液氮，充分研磨。
2、細胞內蛋白樣本：
許多待測蛋白不是分泌蛋白，而是存在于細胞內的蛋白，這個時候，要先收集細胞，洗滌干凈，再破碎細胞，離心取上清。
(1)培養的細胞
A、動物細胞：用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液，使細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融(如果反復凍融，破碎效果不好，就采用超聲波破碎)，以使細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
B、植物細胞：用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液，使細胞濃度達到100萬/ml左右，置于冰盒上，用超聲破碎儀，設置破碎2s，冷卻30s的方式，充分破碎細胞，以使細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
(2)組織的細胞
切割標本后，稱取1g組織，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，去除上清，再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗滌沉淀的細胞三遍。再用上述的細胞破碎方法破碎細胞。
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