培養(yǎng)基制備的基本方法和注意事項

　　培養(yǎng)基配方的選定：

　　同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會有某些差別。因此，除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法，應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進行配制外，一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料，加以比較核對，再依據(jù)自己的使用目的，加以選用，記錄其來源。

　　培養(yǎng)基的制備記錄：

　　每次制備均應(yīng)有記錄，包括名稱，配方及其來源，和各種成份的牌號，最終pH值、消毒的溫度和時間制備的日期和制備者等，記錄應(yīng)復(fù)制一份，原記錄保存?zhèn)洳椋瑥?fù)制記錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放、以防發(fā)生混亂。

　　成分的稱取：

　　各種成分必須精確稱取并要注意防止錯亂，最好一次完成，不要中斷。可將配方置于傍側(cè)，每稱完一種成分即在配方面軍做出記號，并將所需稱取的藥品一次取齊，置于左側(cè)，每種稱取完畢后，即移放于右側(cè)。稱取完畢后，還應(yīng)進行一次檢查。

　　各成份的混合和溶化：

　　培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋，以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中，使細(xì)菌不易生長。最好使用不銹鋼萵加熱溶化，可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。

　　在鍋中溶化時、可先用溫水加熱并隨時擾動、以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用，應(yīng)重新制備。待大部分固體成分溶化后，再用較小火力使所有成分溶化，迄至煮沸。如為瓊脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過程中，因蒸發(fā)而丟失的水分，最后必須加以補足。

　　pH的初步調(diào)正：

　　因為在加熱消毒過程中、pH會有所變化，培養(yǎng)基各成分溶解后，應(yīng)進行PH的初步調(diào)正。例如，牛肉浸液約可降低pH0.2，而腸浸液pH卻會有顯著的升高。因此，對這個步驟，操作者應(yīng)隨時注意探索經(jīng)驗、以期能掌握最終PH，保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。PH調(diào)整后，還應(yīng)煮沸數(shù)分鐘，以利培養(yǎng)基沉淀物的析出。

　　過濾澄清：

　　液體培養(yǎng)基必須絕對澄清，瓊脂培養(yǎng)基也應(yīng)透明無顯著沉淀，因此，須要采用過濾或其它澄清方法以達到此項要求。一般液體培養(yǎng)基可用濾紙過濾法，濾紙應(yīng)折疊成折扇或漏斗形，以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。

　　瓊脂培養(yǎng)基可用清潔的白色薄絨布趁熱過濾。亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過濾。新制肉、肝、血和土豆等浸液時、則須先用絨布將碎渣濾去，再用濾紙反復(fù)過濾。如過濾法不能達到澄清要求、則須用蛋清澄清法。即將冷卻至55~60攝氏度的培養(yǎng)基放入大的三角燒瓶內(nèi)，裝入量不得超過燒瓶容量的1/2，每1000ml培養(yǎng)基加入1~2個雞蛋的蛋白，強力振搖3~5分鐘，置高壓蒸汽滅菌器中、121攝氏度加熱20分鐘、取出趁熱以絨布過濾即可。

　　分裝：

　　培養(yǎng)基的分裝，應(yīng)按使用的目的和要求，分裝于試管、燒瓶等適當(dāng)容器內(nèi)。分裝量不得超過容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵，其外還須用防水紙包扎(現(xiàn)試管一般多有用螺旋蓋者)。分裝時最好能使用半自動或電動的定量分裝器。

　　分裝瓊脂斜面培養(yǎng)基時，分裝量應(yīng)以能形成2/3底層和1/3斜面的量為洽當(dāng)。分裝容器應(yīng)預(yù)先清洗干凈并經(jīng)干烤消毒，以利于培養(yǎng)基的滅菌。每批培養(yǎng)基應(yīng)另外分裝20ml培養(yǎng)基于一小玻璃瓶中，隨該批同時滅菌，以為測定該批最終pH之用。

　　滅菌：

　　一般培養(yǎng)基可采用121攝氏度高壓蒸汽滅菌15分鐘的方法。在各種制備方法中，如無特殊規(guī)定，即可用此法滅菌。

　　某些畏熱成分，如糖類，應(yīng)另行配成20%或更高的濃液，以過濾或間歇滅菌法消毒，以后再用無菌操作技術(shù)、定量加于培養(yǎng)基。明膠培養(yǎng)基亦應(yīng)用較低溫度滅菌。血液、體液和抗生素等則應(yīng)以無菌操作技術(shù)抽取和加入于經(jīng)冷卻約50攝氏度左右的培養(yǎng)基中。

　　瓊脂斜面培養(yǎng)基應(yīng)在滅菌后立即取出，冷至55℃-60℃時，擺置成適當(dāng)斜面，待其自然凝固。

　　質(zhì)量測試：

　　每批制備好以后，應(yīng)仔細(xì)檢查一遍，如發(fā)現(xiàn)破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養(yǎng)基沾染等、均應(yīng)挑出棄去。并測定其最終pH。

　　將全部培養(yǎng)基放入36±1攝氏度恒溫箱培養(yǎng)過夜，如發(fā)現(xiàn)有菌生長，即棄去。

　　用有關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)菌株接種1~2管或瓶培養(yǎng)基，培養(yǎng)24~48小時，如無菌生長或生長不好。應(yīng)追查原因并重復(fù)接種一次，如結(jié)果仍同前，則該批培養(yǎng)基即應(yīng)棄去，不能使用。

　　保存：

　　培養(yǎng)基應(yīng)存放于冷暗處，最好能放于普通冰箱內(nèi)。放置時間不宜超過一周，傾注的平板不宜超過3天。每批均必須附有該批培養(yǎng)基制備記錄副頁或明顯標(biāo)簽。

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