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細胞融合實驗看這篇就夠了

2023年11月03日 11:07上海遠慕生物科技有限公司點擊量：1075

　　細胞融合(cell fusion)，細胞遺傳學名詞，是在自發(fā)或人工誘導(dǎo)下，兩個細胞或原生質(zhì)體融合形成一個雜za種細胞。基本過程包括細胞融合形成異核體(heterokaryon)、異核體通過細胞有絲分裂進行核融合、最終形成單核的雜za種細胞。細胞融合可作為一種實驗方法被廣泛適用于單克隆抗體的制備，膜蛋白的研究。


血清 (2).jpg

　　細胞融合實驗所需試劑：

　　（1）胎牛血清或小牛血清

　　（2）培養(yǎng)基：細胞融合常用的培養(yǎng)液有DMEM、RPMI 1640 及無血清培養(yǎng)基等。DMEM有高糖（4500mg／L）及低糖（1000mg／L）之分。雜交瘤細胞在上述幾種培養(yǎng)基中均能良好的生長與增殖

　　（3）HAT及HT培養(yǎng)液：HAT、HT以五十分之一的比例加入培養(yǎng)基（ DMEM或RPMI 1640）

　　（４）聚乙二醇（PEG）溶液：稱取一定量的PEG，高壓蒸汽滅菌（8磅30分鐘），待其冷至50℃左右，與等體積的RPMI1640混合，即為50%的PEG溶液，封口后4℃放置備用。用于細胞融合的PEG的分子量可在1000－6000之間，目前已有商品化的50%PEG溶液可直接用于細胞融合。

　　細胞融合的方法：

　　動物細胞雜交或細胞融合

　　將兩個不同種的親本細胞A和B，以滅活的仙臺病毒或聚乙二醇(PEG)為融合誘導(dǎo)劑，使A和B兩細胞融合成為一個具兩個遺傳性不同核的異核體（如遺傳性相同的核融合在一起叫同核體）。

　　隨后異核體經(jīng)有絲分裂成為兩個具有A和B兩親本的za種融合核。AB雜za種經(jīng)多次分裂，B親本的染色體會逐漸減少到一個或完wan全消失。

　　PEG促進細胞融合注意事項：

　　（1）事先做好兩種原生質(zhì)體融合的識別標記，如色素、缺陷型、抗性標記等。

　　（2）原生質(zhì)體或細胞密度應(yīng)在105個/ml，兩種原生質(zhì)體或細胞按1：1等量混合

　　（3）PEG誘導(dǎo)融合的效果，同分子量大小及濃度高低密切相關(guān)。分子量和濃度愈大，促進細胞融合的能力愈高，而其粘度及對細胞的毒性也隨之增大，故通常以選用分子4000-6000濃度30-50%的PEG進行融合為宜。

　　（4）PEG使細胞融合或致死劑量界限很狹小，為達到成功有效的融合，還必須嚴格掌握PEG的處理時間。一般加入PEG后，24℃培育10-20min（注意時間宜短不宜長，過長使原生質(zhì)體周圍包裹一層膜形成凝集體，降低融合率），緩緩加入高鈣離子溶液15min后用沖洗液清洗，離心收集細胞或原生質(zhì)體。


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