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ELISA實(shí)驗(yàn)之洗滌小技巧及提純的方法

2023年11月29日 10:43上海古朵生物科技有限公司點(diǎn)擊量：586

　　ELISA實(shí)驗(yàn)之洗滌小技巧及提純的方法


　　在ELISA實(shí)驗(yàn)中，主要是靠洗滌來達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。洗滌在ELISA過程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟，卻也決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。通過洗滌來清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。今天古朵生物技術(shù)小編來介紹一下ELISA實(shí)驗(yàn)的洗滌小技巧吧!

　　洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動(dòng)洗滌儀外，手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種，過程如下：

　　(1)浸泡式

　　a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液;

　　b.用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后，即甩去);

　　c.浸泡，即將洗滌液注滿板孔，放置1-2分鐘，間歇搖動(dòng)，浸泡時(shí)間不可隨意縮短;

　　d.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;

　　e.重復(fù)操作c 和d，洗滌3-4次(或按說明規(guī)定)。在間接法中如本底較高，可增加洗滌次數(shù)或延長(zhǎng)浸泡時(shí)間。微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的，非離子型洗滌劑既含疏水基團(tuán)，也含親水基團(tuán)，其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵結(jié)合，從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合，并借助于親水基團(tuán)和水分子的結(jié)合作用，使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài)，從而脫離固相載體。

　　(2)流水沖洗式

　　流水沖洗法最初用于小珠載體的洗滌，洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時(shí)附接一特殊裝置，使小珠在流水沖擊下不斷地滾動(dòng)淋洗，持續(xù)沖洗2分鐘后，吸干液體，再用蒸餾水浸泡2分鐘，吸干即可。浸泡式猶如盆浴，流水沖洗式則好比淋浴，其洗滌效果更為，且也簡(jiǎn)便、快速。

　　已有實(shí)驗(yàn)表明，流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時(shí)設(shè)法加大水流量或加大水壓，讓水流沖擊板孔表面，洗滌效果更佳。

　　Elisa試劑盒提純的方法：

　　在ELISA實(shí)驗(yàn)中，ELISA試劑盒的好壞會(huì)直接影響實(shí)驗(yàn)的最終結(jié)果，今天就向大家介紹一下ELISA試劑盒提純的方法。

　　1、蒸餾：對(duì)于易揮發(fā)的試劑，如常用的無機(jī)酸，有機(jī)溶劑等是比較常用的提純方法，可以根據(jù)沸點(diǎn)的高低選用常壓或減壓蒸餾法。

　　2、升華：對(duì)于某些易升華的試劑，如碘、萘等，此法比較簡(jiǎn)便。

　　3、重結(jié)晶：適用于大多數(shù)固體試劑的提純，其關(guān)鍵是選擇好合適的溶劑。

　　4、溶劑萃取：無論是將母體還是將雜質(zhì)萃取到有機(jī)溶劑相中，均可達(dá)到提純的目的。

　　5、離子交換色譜分離。

　　ELISA上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營(yíng)宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。古朵試劑盒

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