2024年10月11日 08:55通派（上海）生物科技有限公司點擊量：157
細胞：WiDr細胞
中文名稱：人大腸癌細胞
生長特性：貼壁細胞
培養基：1640 培養基 血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）
凍存條件：50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
WiDr細胞常規培養傳代流程（ 請嚴格遵照無菌操作）
1． 吸出原培養瓶中的培養基，PBS 緩沖液潤洗細胞兩次，加 2-3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞（注意把握消化時間，通常控制在 1-2min）
2． 鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細胞漂浮）去掉yi酶，加 6~8ml 培養基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散。
3． 取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中，添加適當的培養基，把細胞懸液打勻，于培養箱中培養。
4． 注意培養基 PH 值變化情況，定期換液（每周 2-3 次），待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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HSP90β反義核酸載體轉染細胞HSP90β蛋白的表達
了解HSP90β反義核酸轉染細胞中HSP90β蛋白的表達。
通過lipofectamine介導將HSP90β反義核酸重組子pcDNA-HSP90轉染人胃癌細胞系SGC7901、人胃癌多藥耐藥細胞系SGC7901/VCR、人肝癌細胞系HCC7402及人食管癌細胞系Ec109。
(HBZY-1細胞：貼壁細胞 通派細胞庫培養條件：90% 低糖DMEM、10% FBS)
經用G418進行篩選，對篩選出的陽性克隆用western blot檢測HSP90β蛋白的表達。
結果:pcDNA-HSP90轉染人胃癌細胞系SGC7901，人胃癌耐藥細胞系SGC7901/VCR，人肝癌細胞系HCC7402及人食管癌細胞系Ec109后，用G418篩選出的陽性克隆，分別被命名為:AH-SGC7901，AH-SGC7901/VCR，AH-HCC7402及AH-Ec109。
（HBMEC細胞：貼壁細胞 通派細胞庫培養條件：90% DMEM、10% FBS）
Westernblot檢測結果表明，AH-SGC7901，AH-SGC7901/VCR，AH-HCC7402及AH-Ec109表達的HSP90β蛋白低于其親本細胞。
（HConEpic細胞：貼壁細胞 通派細胞庫培養條件：90% 高糖DMEM、10% FBS）
結論:HSP90β反義核酸可封閉HSP90βmRNA，使pcDNA-HSP90轉染的細胞AH-SGC7901，AH-SGC7901/VCR，AH-HCC7402及AH-Ec109表達的HSP90β蛋白減少，為研究HSP90下調對腫瘤細胞生 物學活性的影響提供了實驗材料。
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