
2024年11月04日 08:23通派(上海)生物科技有限公司點擊量:140
細胞:HFSF細胞
中文名稱:人胚胎眼鞏膜成纖維細胞
生長特性:貼壁細胞
培養基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
HFSF細胞常規培養傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養瓶中的培養基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4. 注意培養基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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NIH3T3細胞中PTPα基因高表達激活Src的早期細胞表型變化
利用蛋白質酪氨suan磷酸酶α (PTPα)基因轉染NIH3T3細胞;(通派細胞庫供應:PIEC細胞)研究PTPα誘導前后細胞生物學行為的變化, 為腫瘤形成早期機制的研究提供細胞模型;
用攜帶PTPα基因的四環素調控體系轉染NIH3T3細胞并誘導24 h后, (通派細胞庫供應:PK-15細胞)用RT-PCR和蛋白質印跡法證實PTPα在誘導細胞中的表達高于未誘導細胞, 用RT-PCR及蛋白質印跡法發現內源性Src的表達水平在誘導與未誘導細胞中沒有變化;
而Src激酶的活性在誘導細胞中增高, (通派細胞庫供應:PK-1細胞)并且在誘導細胞中Src的酪氨suan磷酸化水平降低. 再用透射式電子顯微鏡和流式細胞技術觀察到誘導細胞的表型已發生變化;
實驗結果表明PTPα誘導24 h使細胞的表型開始發生轉化, (通派細胞庫供應:MDCK細胞)這種變化很可能與PTPα表達水平升高使Src C末端的pTyr527去磷酸化而激活Src相關;
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