MEF細(xì)胞小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

2024年11月07日 10:37通派（上海）生物科技有限公司點(diǎn)擊量：31

細(xì)胞：MEF細(xì)胞

中文名稱：小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞

培養(yǎng)基：DMEM-H +10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

MEF細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作）

1．吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?1-2min）

2．鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)（不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ魕i酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。

3．取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4．注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液（每周 2-3 次），待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或凍存。

（網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，以細(xì)胞庫(kù)管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫(kù)管理員，避免不必要的損失；）

SUMO化修飾與細(xì)胞的生物鐘

盡管已經(jīng)知道CLOCK是調(diào)控BMAL1磷酸化的，它同時(shí)還調(diào)控著B(niǎo)MAL1的SUMO化過(guò)程。但是BMAL1的SUMO化過(guò)程究竟有什么生物學(xué)功能？（通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng)：PLC/PRF/5細(xì)胞）

與野生型BMAL1相比，突變的BMAL1（K259R）的量并不具有周期性的振蕩形式。另外，BMAL1（K259R）的量是野生型的兩倍，所以該蛋白的降解似乎有著非常重要的生物學(xué)功能。（通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng)：RKO細(xì)胞）

Bmal1-/-小鼠（Bmal1基因敲除）的胚胎成纖維細(xì)胞的E-box控制的基因的振蕩形式（Dbp）被改變了。BMAL1的病毒表達(dá)載體可以拯救該基因的周期性振蕩，（通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng)：SW480細(xì)胞）但是如果是BMAL1(K259R)，則產(chǎn)生了更短的Dbp節(jié)律性。

SUMO化在BMAL1的周期性表達(dá)和功能中具有重要作用，（通派細(xì)胞庫(kù)供應(yīng)：SW598細(xì)胞）反映出了一個(gè)生物鐘調(diào)節(jié)的重要特征。今后的研究應(yīng)該側(cè)重于識(shí)別SUMO通路中的各個(gè)元素，因?yàn)樗鼈儺?dāng)中有些可能是選擇性為生物鐘調(diào)控服務(wù)的。

關(guān)鍵詞：培養(yǎng)箱 PLC

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