
2024年11月09日 10:57通派(上海)生物科技有限公司點擊量:165
細胞:RGC-5細胞
中文名稱:小鼠視網膜神經節細胞
生長特性:貼壁細胞
培養基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
RGC-5細胞常規培養傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養瓶中的培養基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4. 注意培養基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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利用光遺傳學"遙控"癌細胞的行為
為了解細胞信號的動態,研究需要將膜受體蛋白激活和使其失活,膜受體蛋白作為一個細胞內外世界之間的中轉站。(b.End3細胞 來源:通派細胞庫 腦血管內皮細胞)理想情況下,這種激活在短時間(幾秒到幾分鐘)以及近的目標位置(微米到毫米)內發生。
如此高水平的活化精密度不能使用當前的藥理學和遺傳學的方法來實現。(Meth-A細胞 來源:通派細胞庫)光遺傳學利用光來控制細胞的活性,以及具有在時間和空間上精確地被應用和移動(施加和除去)的優點。
重新設計受體酪氨suan激酶(RTKs),(小鼠Renca細胞 來源:通派細胞庫 小鼠腎癌細胞)在光的控制下,感測生長因子和激素的必要的細胞表面受體。當一個信號分子結合到細胞表面的RTKs,兩種受體相互結合的過程稱為二聚化作用。
這個過程會激活細胞的信號轉導。(人Hek-293細胞 來源:通派細胞庫 人胚腎細胞)將哺乳動物的RTKs的那些部分與光-氧-電壓傳感領域(鑒定黃綠藻的可逆光傳感器)結合。在工程化受體中,二聚化步驟和隨后的細胞信號轉導現在可以通過光隨著藻蛋白光感打開和關閉,以及彼此結合。
在腫瘤細胞中,工程受體的活化導致細胞形態變化,(人Hela細胞 來源:通派細胞庫 人宮頸細胞)細胞增殖和基因表達,增加癌癥的惡性程度的特性。在血細胞中,活化導致細胞出芽,典型的新血管形成。
RTKs通過光激活二聚化作用調節發育是哺乳動物受體的光激活二聚化作用的第一個實例。(人Intestine 407細胞 來源:通派細胞庫 人小腸細胞)光控制下的RTK提供了強大的光遺傳學的方法來啟動細胞信號和操縱細胞的行為。
新開發的受體引發癌癥和血液中內皮細胞復雜的細胞活動。(SBC-7細胞 來源:通派細胞庫 肺癌細胞)這些細胞代表根據光控行為的新模型,以及能夠用新的方法來確定藥物。
這與癌細胞的相反,細胞信號轉導的不受控制的活化導致惡性腫瘤有關的特征,信號轉導的光激活可能拯救退行性疾病的細胞存活和功能。
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