【PCR檢測】病原微生物檢測操作方法

2024年12月11日 10:28上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司點擊量：279

多聚酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)是一種模擬天然DNA復(fù)制過程，在體外擴(kuò)增特異性DNA（或RNA）片段的新技術(shù)。本實驗是將待檢雙鏈DNA經(jīng)94℃高溫變性成單鏈作模板，然后加入一對人工合成的寡核苷酸引物，引物分別與待擴(kuò)增DNA片段的兩端互補(bǔ)，經(jīng)55℃低溫退火，引物與模板互補(bǔ)結(jié)合。在72℃條件下，結(jié)合于模板上的引物在DNA聚合酶的催化下，利用反應(yīng)體系中的4種dNTP為原料，按堿基互補(bǔ)配對的方式延伸合成兩條新的DNA鏈。經(jīng)過20-30個周期后，特異的目的DNA可擴(kuò)增百萬倍以上。PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后即可觀察到特異的擴(kuò)增條帶。

PCR方法操作簡便，靈敏度高，可檢測出少至0.1pg的目的DNA。目前已廣泛應(yīng)用于多種病原微生物及寄生蟲的檢測。

【材料】

1．無菌雙蒸水、石蠟油、溴化乙錠

2．10×PCR反應(yīng)緩沖液

3．25mmol dNTP混合液

4．引物1，引物2各50pmol／u1

5．模板DNA

6．5U／ul Taq DNA聚合酶

【儀器】

1．PCR擴(kuò)增儀

2．電泳儀

3．紫外線分析儀

【方法】

1．在0.5m1EP管中，加入以下成分：

10×PCR反應(yīng)緩沖液5u1

引物1 2ul

引物1 2ul

模板DNA 10u1

dNTP混合液4ul

Taq DNA聚合酶1ul

無菌雙蒸水加至50ul

混勻,加50 ul石蠟油，防止樣品水分蒸發(fā)。

2．將反應(yīng)管置于PCR儀中，94℃變性4min。然后按94℃變性30s→55℃退火30s→72℃延伸1min，循環(huán)35次后，72℃延伸10 min。

3．反應(yīng)完成后，取l0ul PCR擴(kuò)增液，加至2％瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳，電壓100V，電泳30~60min后，置紫外線分析儀下觀查擴(kuò)增結(jié)果。

關(guān)鍵詞：電泳儀

上一篇：tc-壓力變送器的特點與用途

下一篇：全自動蟲情測報儀：根據(jù)害蟲習(xí)性設(shè)置，提高監(jiān)測效率的智能型蟲情測報燈

版權(quán)與免責(zé)聲明： 凡本網(wǎng)注明“來源：智慧城市網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-智慧城市網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：智慧城市網(wǎng)www.cmr6829.com”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。

本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其它來源（非智慧城市網(wǎng)www.cmr6829.com）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點或和對其真實性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。

免費(fèi)注冊后，你可以
了解安防行業(yè)更多資訊查看安防行業(yè)供求信息凸顯安防行業(yè)自身價值馬上注冊會員
想快速被買家找到嗎
只需要發(fā)布一條商機(jī)，被買家找到的機(jī)會高達(dá)90%！還等什么？馬上發(fā)布信息

編輯精選

甘肅金昌停車場管理服務(wù)、托管運(yùn)營解決方案

在政策創(chuàng)新的同時，金昌市積極推進(jìn)停車資源整合。2023年建成投用的城北停車場，作
便攜式能見度監(jiān)測儀—支持?jǐn)?shù)據(jù)存儲和歷史記

便攜式能見度監(jiān)測儀是一種輕巧便攜、功能強(qiáng)大的氣象監(jiān)測設(shè)備，廣泛應(yīng)用于交通、戶
遼寧撫順人臉識別門禁廠家、人行通道擺閘/

隨著《遼寧省新型智慧城市建設(shè)試點工作方案》的深入推進(jìn)，這座因煤而興的城市，正
AcreIEMS能效管理平臺-推動智慧能源系統(tǒng)升

AcrelEMS能效管理平臺是安科瑞電氣股份有限公司推出的一款企業(yè)微電網(wǎng)綜合能源管理
半自動1-6克小型藥粉粉末分裝機(jī)人工接料

清易牌粉末分裝機(jī)專為分裝粉末顆粒物料研發(fā)生產(chǎn)，采用微電腦智能控制下料，精度更
陜西寶雞停車場管理服務(wù)、托管運(yùn)營解決方案

在國家“雙碳“戰(zhàn)略和新型智慧城市建設(shè)背景下，寶雞正通過政策創(chuàng)新與技術(shù)迭代，構(gòu)
鐵跨公立交橋涵及限高防護(hù)架碰撞報警系統(tǒng)，

鐵跨公立交橋涵及限高防護(hù)架碰撞報警系統(tǒng)，是科技與交通安全管理深度融合的產(chǎn)物。
便攜式小型氣象站：溫度、濕度、風(fēng)速、風(fēng)向

其機(jī)身采用輕量化設(shè)計，僅重數(shù)公斤，折疊后體積小巧，可輕松裝入背包，無論是徒步

本站精選

一文回顧近期安防要聞（4月15日-4月22日）

隨著技術(shù)進(jìn)步，安防在城市發(fā)展中的作用將更加突出。近期有哪些大事發(fā)生？一起來看
交通領(lǐng)域動態(tài)速覽｜我國新車裝載智能化座艙

交通建設(shè)是經(jīng)濟(jì)增長的重要推動力，促進(jìn)經(jīng)濟(jì)增長和擴(kuò)大就業(yè)。小編在本文中對交通領(lǐng)
地方工信快報來了｜河南、四川、天津......

智慧城市提升資源利用效率，改善居民生活質(zhì)量的城市發(fā)展模式。作為與智慧城市行業(yè)
智慧城市一周熱點回顧｜工信部發(fā)布一季度工

2025年4月14日-4月20日，智慧城市領(lǐng)域有哪些動態(tài)變化發(fā)生？一起來看看！
交通領(lǐng)域動態(tài)速覽｜杭州將制定智能網(wǎng)聯(lián)車輛

交通建設(shè)是經(jīng)濟(jì)增長的重要推動力，促進(jìn)經(jīng)濟(jì)增長和擴(kuò)大就業(yè)。小編在本文中對交通領(lǐng)
地方工信快報來了｜山東、上海、海南......

智慧城市提升資源利用效率，改善居民生活質(zhì)量的城市發(fā)展模式。作為與智慧城市行業(yè)
交通領(lǐng)域動態(tài)速覽｜推進(jìn)智能網(wǎng)聯(lián)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)研

交通建設(shè)是經(jīng)濟(jì)增長的重要推動力，促進(jìn)經(jīng)濟(jì)增長和擴(kuò)大就業(yè)。小編在本文中對交通領(lǐng)
地方工信快報來了｜江蘇、上海、香港......

智慧城市提升資源利用效率，改善居民生活質(zhì)量的城市發(fā)展模式。作為與智慧城市行業(yè)