2025年04月03日 10:45通派（上海）生物科技有限公司點擊量：10
細胞：FRH-0201細胞
中文名稱：人膽管癌細胞
生長特性：貼壁細胞
培養基：1640 培養基 血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）
凍存條件：50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規培養傳代流程（ 請嚴格遵照無菌操作）
1． 吸出原培養瓶中的培養基，PBS 緩沖液潤洗細胞兩次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進行消化細胞（注意把握消化時間，通?？刂圃?1-2min）
2． 鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細胞漂?。┤サ粢萠酶，加 6~8ml 培養基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散。
3． 取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中，添加適當的培養基，把細胞懸液打勻，于培養箱中培養。
4． 注意培養基 PH 值變化情況，定期換液（每周 2-3 次），待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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篩選了約50,000個化學小分子。就像一個普通的圖書館里收藏有各種不同的圖書一樣，這個組合文庫中也包含了各種不同的有機小分子化合物。
通過這次篩選分類，發明了一種新方法來識別具有控制干細胞分化為神經元的能力的分子。
他們將一個編碼熒光素酶的報告基因導入胚胎性癌細胞中，使該基因插入到一個只在神經元中表達的基因的啟動子序列下游。然后研究人員將這些胚胎性癌細胞放置到培養板獨立的小孔內，每個孔內添加文庫中不同的小分子。
如果任何小孔中有經過改造的胚胎性癌細胞被誘導為神經元，這些神經元就會表達熒光素酶，發出熒光。胚胎性癌起源于具有多分化潛能的原始sheng殖細胞，為高度惡性腫瘤，發病高峰在30～40歲，嬰兒及兒童也可發生。
一旦發現一些細胞經某種小分子處理后分化為神經元，就用精確度更高的測定方法來進一步證實，包括用特殊標記對細胞染色，顯微鏡下檢查個體細胞形狀等。神經元具有獨_特的圓形胞體和不對稱的分裂過程。
最后，篩選出一些能誘導神經元分化的分子，而他們選取其中一個叫做TWS119,的小分子進行深入研究。
當他們檢查TWS119誘導神經元分化的詳細過程時，發現該分子與一種細胞激酶--糖原合成激酶-3beta (GSK-3beta)結合。GSK-3beta是一種多功能信號傳導酶，與一些生理信號傳導過程有關，并通過附加一個磷酸基到酶上，調節其它酶的活性。
操縱GSK-3beta會誘導干細胞分化為神經元，--這一事實揭示了干細胞向神經元轉化過程中復雜的信號傳導級聯反應中的一些基本信息。TWS119調節GSK-3beta活動這一事實又說明，TWS119可能為了解控制干細胞命運的機制提供新線索，最終用于體內干細胞療法。
Schultz 和 Ding正著手研究探明這種結合如何引導干細胞分化為神經元的確切機制。
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