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人胃癌細胞SNU-5細胞 抗體庫技術(shù)

2013年08月09日 10:02通派（上海）生物科技有限公司點擊量：1700

人胃癌細胞SNU-5細胞   抗體庫技術(shù)

 
 90年代初提出了抗體庫技術(shù)?？贵w庫技術(shù)簡單地說就是用細菌克隆取代B細胞克隆來表達抗體庫（repertoire）。由于RT-PCR技術(shù)的發(fā)展，大腸桿菌直接表達有功能性抗體分子片斷的成功以及噬菌體顯示技術(shù)（phage display）的問世，在90年代初出現(xiàn)噬菌體抗體庫（phage antibody library）技術(shù)，該技術(shù)使得人們從應(yīng)用DNA重組技術(shù)改造現(xiàn)有的單抗發(fā)展到用基因工程技術(shù)克隆新的單抗，從而使抗體工程進入一個全新的時期。
　　人胃癌細胞SNU-5細胞   抗體庫技術(shù)噬菌體抗體庫 繼雜交瘤技術(shù)之后又一突破性進展的用于制備新型抗體的是噬菌體抗體庫技術(shù)。Winter等人在1994年創(chuàng)建了噬菌體抗體庫技術(shù)，克服了人體不能隨意免疫的缺點，用人的外周血制備抗體文庫，從而獲得人源性基因工程抗體。而且將抗體基因的克隆和表達融為一體，同在一種載體上進行，將抗體基因表達在載體的表面，用固相化抗原對表達產(chǎn)物的載體進行淘篩（panning），在數(shù)日內(nèi)就可篩選出陽性克隆，從而能構(gòu)建出大庫容文庫囊括天然全套抗體基因，人們*可以用基因工程方法研制任何一種具有高度特異性的抗體，使抗體工程的設(shè)想成為現(xiàn)實。采用噬菌體抗體庫技術(shù)篩選抗體不必進行動物免疫，易于制備稀有抗原的抗體及篩選全人源性抗體、高親和力抗體。同時也將抗體工程的研究推向了新高潮。
1.方法簡單易行，節(jié)省時間?？赏ㄟ^發(fā)酵生產(chǎn)、大量制備。
　　2.篩選容量增大，可在數(shù)周內(nèi)篩選100萬-1億個克隆，可獲得高親和力的人源化抗體。
　　3.可直接從未經(jīng)免疫的人或小鼠的淋巴細胞中得到抗體基因或IgV區(qū)基因，因此可以獲得*人源化的抗體，克服了人雜交瘤細胞不穩(wěn)定的缺點，避開了人工免疫和雜交瘤技術(shù)。
　人胃癌細胞SNU-5細胞   抗體庫技術(shù)　4.可模仿體內(nèi)免疫過程，模擬天然全套抗體庫，方便的“制造”和克隆針對任何抗原的抗體。
　　隨著基因工程抗體技術(shù)的發(fā)展，在我國有些實驗室開始了噬菌體抗體庫的構(gòu)建。用抗體庫技術(shù)可直接制備人源抗體，例如利用被病原微生物感染的病人外周血細胞制備噬菌體抗體庫，用特定抗原進行篩選，獲得抗乙肝表面抗原、甲肝病毒的人源抗體?？贵w庫技術(shù)也被用于抗體性能改良，例如用鏈替換方法，以親本抗體的一條鏈（輕鏈）與另一條鏈 （ 重鏈）的文庫組合，構(gòu)建抗體庫，篩選高親和力的克隆，再固定重鏈，用同樣方法選擇具有更高親和力的輕鏈。一些特異性好、有應(yīng)用前景的鼠抗體，利用抗原表位定向選擇（EGS）方法，以鼠單抗可變區(qū)為模板，經(jīng)噬菌體展示技術(shù)，通過抗原導(dǎo)向，篩選能夠模擬鼠單抗可變區(qū)、結(jié)合相同抗原決定簇的人抗體，經(jīng)這一方法獲得人源抗體。國內(nèi)也有實驗室在計算機輔助設(shè)計下，將鼠抗體表面氨基酸殘基“人源化”，主要將鼠 Fv段表面暴露的骨架區(qū)殘基中與人Fv不同者改為人源性，使Fv的表面人源化，但仍保留其與抗原結(jié)合的特性。目前的問題是，有很多試劑型抗體或診斷用抗體進入市場，而治療用抗體只有少數(shù)進入臨床試驗。分析主要原因，一是工程抗體表達量低。國內(nèi)很多實驗室，真核細胞中抗體表達量在1 毫克／升以下，很難用于生產(chǎn)。僅個別實驗室在對載體進行改造后，抗體表達量達到40毫克／升。二是動物細胞規(guī)?；囵B(yǎng)技術(shù)還不成熟，與國外相比存在很大差距。由于技術(shù)和經(jīng)費等原因，我們動物細胞培養(yǎng)的規(guī)模zui大為50升，培養(yǎng)方式大多是采用微載體，懸浮批次和懸浮灌流尚屬空白。在噬菌體抗體庫的基礎(chǔ)上，在近幾年又發(fā)展了核糖體展示抗體庫技術(shù)。核糖體展示抗體庫技術(shù)代表了抗體工程的將來發(fā)展趨勢。
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