小鼠肝細胞原代培養實驗
實驗方法原理 將小鼠的肝細胞從機體中取出，經胰酶、螯合劑（常用EDTA）處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖。
實驗材料小鼠
試劑、試劑盒DMEM無血清DMEM培養基胰酶PBS
儀器、耗材飯盒紗布剪子鑷子燒杯平皿研磨玻片濾網離心管6孔培養板吸管移液管手套微量加樣器
實驗步驟
一、實驗材料準備
1. 動物：小鼠。
2. 試劑：DMEM（含血清）、無血清DMEM培養基、胰酶、PBS。
3. 器械：飯盒、紗布、小剪子、小鑷子、大鑷子、大燒杯、平皿、研磨玻片、濾網、離心管（15/50 ml）、6孔培養板、吸管、移液管、手套、微量加樣器。
小鼠肝細胞原代培養實驗4. 準備：酒精擦拭臺面后把物品擺放好，開紫外線燈照30分鐘后開鼓風機吹至實驗結束。
二、方法
1. 將小鼠斷頸致死，置75%酒精泡2-3秒鐘，取肝臟，置于盛有PBS的平皿中。
2. 剔除脂肪、結締組織、血液等雜物，轉移到另一個盛有PBS液的平皿中。
2.3 用手術剪將臟器剪成小塊（大小約1mm2），玻片研磨，轉到離心管，離心（1 000 rpm，5 min）。
4. 視組織或細胞量加入5-6倍（3-5 ml）胰酶，37℃中消化20分鐘，每隔5分鐘振蕩一次，或用吸管吹打一次，使細胞分離。
5. 加入3-5 ml含血清的培養液以中止胰酶消化作用。
6. 用100目孔徑濾網濾過，除去未消化的大組織塊。
7. 再次離心5 min，棄上清液。
小鼠肝細胞原代培養實驗8. 加入無血清培養液5 ml，沖散細胞，再離心一次，棄上清液。
9. 加入含血清的培養液1-2 ml（視細胞量），血球計數板計數。
10. 將細胞調整到5×105/ml左右，轉移至6孔培養板中，37℃下培養。
