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影響免疫電鏡的因素

2014年11月04日 13:18上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司點(diǎn)擊量：455

 本司主營(yíng)產(chǎn)品：ELISA試劑盒,檢測(cè)試劑盒,分子生物學(xué)試劑盒,生物診斷試劑盒,金標(biāo)檢測(cè)試劑盒,放免試劑盒,生物試劑,胎牛血清,各類(lèi)動(dòng)物血清,各種抗體,實(shí)驗(yàn)儀器。

標(biāo)記物  用于電鏡觀察的標(biāo)記物有三類(lèi)：一類(lèi)是電子密度致密的標(biāo)記物，如鐵蛋白、辣根過(guò)氧化物酶等。另一類(lèi)則是放射性同位素，如135I、35S、32P、14C、3H等，第三類(lèi)則是有*形狀的標(biāo)記物，如血蘭蛋白、噬菌體等。

對(duì)標(biāo)記物的要求是：具有特定的形狀、不影響抗原抗體復(fù)合物的特性與形狀。目前用于免疫電鏡的標(biāo)記物主要是鐵蛋白和HRP。兩者各有其優(yōu)點(diǎn)，鐵蛋白電子密度致密。觀察時(shí)反差大，優(yōu)于酶標(biāo)記，但鐵蛋白分子量大（460 000），穿透能力差，所以適于細(xì)胞表面抗原的定位，另外鐵蛋白的標(biāo)記過(guò)程比較復(fù)雜。HRP分子量小（40 000），穿透力強(qiáng)，有利于標(biāo)記抗體進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，適于細(xì)胞內(nèi)的抗原定位。
2．固定劑  固定是免疫電鏡較關(guān)鍵的一步，免疫電鏡中的固定與一般超薄切片中的固定的不同之點(diǎn)在于既考慮保存細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu),又要考慮到抗原的失活性問(wèn)題。
（1）           固定劑的要求：①不損害細(xì)胞內(nèi)抗原的活性；②固定速度快、效果好；③分子量小，易于滲透；④固定后,不引起交聯(lián)，造成空間的阻礙，影響標(biāo)記抗體進(jìn)入抗原位。
（2）           影響固定的因素有：①采用固定劑的種類(lèi)；②固定劑的濃度，濃度過(guò)大，對(duì)抗原的活性有影響，濃度過(guò)小，固定效果差；③固定劑的pH；④固定劑的溫度,一般采用2℃～4℃冷固定；這樣能降低細(xì)胞的自浴作用和水分的抽提；⑤固定時(shí)間與溫度有關(guān)，溫度高，固定快，也與緩沖系的離子強(qiáng)度有關(guān)，離子強(qiáng)度大，滲透壓大，穿透力強(qiáng)，固定要快。不同的固定劑，或同一固定劑的不同濃度所需的固定時(shí)間也不一致；⑥與被固定的細(xì)胞類(lèi)型有關(guān)。

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