一、原理 
葉綠素a、b在長波方面zui大吸收峰分別位于663nm和645nm。
同時在該波長時，葉綠素a、b的比吸收系數K為已知，我們即可以根據Lambert－Beer定律，列出濃度C與光密度D之間的關系式： 
D663＝82.04Ca＋9.27Cb …………………………………（1） 
D645＝16.75Ca＋45.6Cb …………………………………（2） 
（1）、（2）式中的D663、D645為葉綠素溶液在波長663nm和645nm時的光密度。 

Ca、Cb為葉綠素a、b的濃度，單位為每升克數。 
16.75、45.6為葉綠素a、b在波長645nm時的比吸收系數。
解方程式（1）（2），則得：
葉綠素a、b含量的測定（分光光度法)
此時，CT為總葉綠素濃度，CA 、CB為葉綠素a、b的濃度，單位為每升毫克，利用上面（3）（4）（5）式，即可以計算a、b總葉綠素的濃度。 
二、儀器藥品 
扭力天平 剪刀 研缽 移液管 漏斗 大試管 丙酮 碳酸鈣 
石英砂 721型分光光度計（如有其他精密型號的分光光度計則更好） 
三、實驗步驟 
1、提取葉綠素 
從植株上選取有代表性的葉片數張，于扭力天平上稱取0.1g鮮重，剪碎后置于研缽中，加蒸餾水5－6ml，碳酸鈣少許及適量的石英砂，仔細研磨成勻漿，用蒸餾水定容到10ml。然后用移液管吸取1.5ml，置于一大試管中，加入80％丙酮6ml，搖動試管，促使葉綠素溶于丙酮中，靜置片刻使殘渣沉于管底，將上面綠色上清夜過濾在另一干凈的試管中，此即為葉綠素丙酮溶液，做測定用。 
2、測量光密度 
取一光徑為1cm的比色杯，注入上述葉綠素丙酮溶液，另以80％丙酮注入同樣的比色杯中，作為空白對照，與663nm和645nm波長下讀取光密度，讀數時必須將靈敏度旋鈕撥到3位置，以使狹縫zui小，減少雜散波長，提高測量準確性。 
3、結果計算 
根據測量得到的光密度D663 、D645，代入（3）式計算溶液中葉綠素a的含量；代入（4）式中計算得到葉綠素b的含量，代入（5）式計算得到葉綠素總含量。 
zui后計算葉子樣品中葉綠素含量時，需要考慮稀釋因子，則得到： 
V1為定容體積；V2為被取體積；V3為加入丙酮后的體積