質(zhì)粒小量提取試劑盒I型，Plasmid Mini Kit I(200)說(shuō)明書

上海遠(yuǎn)慕專業(yè)供應(yīng)美國(guó)Omega品牌產(chǎn)品，部分系列有：質(zhì)粒大量提取試劑盒，快速過(guò)濾超大量質(zhì)粒提取試劑盒，宏量質(zhì)粒提取試劑盒，質(zhì)粒快速中量提取試劑盒，其他系列等，更多系列請(qǐng)！

名稱：質(zhì)粒小量提取試劑盒I型

品牌：Omega

供應(yīng)商：上海遠(yuǎn)慕

型號(hào)：Plasmid Mini Kit I(200)

用途：從小于5ml培養(yǎng)過(guò)夜的細(xì)菌培養(yǎng)液中純化約35ug質(zhì)粒DNA

質(zhì)粒小量提取試劑盒I型特性與優(yōu)點(diǎn)：
安全－無(wú)酚lvfang等危險(xiǎn)的有機(jī)物抽提
可靠－操作簡(jiǎn)單，每次都能獲得理想的效果
快速－可在50分鐘內(nèi)完成一次抽提工作

Plasmid Mini Kit I(200)操作流程：

1.在10-20ml試管中，將攜帶有所需質(zhì)粒的E.coli接種到5ml LB培養(yǎng)基LB（含氨芐青霉素50μg/ml），37℃振蕩培養(yǎng)12-16h。需特別指出的是：endA陰性的E.coli菌株用于常規(guī)質(zhì)粒提取，如DH5α和JM109。

2.取1.5~5ml菌液室溫10000×g離心1min。  

3.去上清，加250µl溶液Ⅰ（含RNase A），渦漩振蕩器震蕩至菌體*懸浮。

4.加入250µl溶液Ⅱ，溫和顛倒離心管4~6次，獲得澄清的裂解液。室溫孵育2min，劇烈混合會(huì)使剪切染色體DNA，降低質(zhì)粒純度。(儲(chǔ)存溶液Ⅱ應(yīng)擰緊瓶蓋)。 

5.加350µl溶液Ⅲ，溫和顛倒數(shù)次混合，至出現(xiàn)白色絮狀沉淀。 

6.室溫13000×g離心10min。

7.特別小心吸取上清，移至潔凈的裝配好容積2ml離心管的吸收柱中。要保證沒有吸入沉淀和細(xì)胞碎片。室溫10000×g離心1min，至裂解物*通過(guò)吸收柱。  

8.棄濾過(guò)液，加500µl Buffer HB，10000×g離心1min，清洗吸收柱，除去殘余蛋白質(zhì)保證DNA的純度。  如果接下來(lái)的步驟對(duì)質(zhì)粒純度要求不高，如酶消化法等其它篩選方法，此步可省略。 

9.棄濾過(guò)液，再用100%乙醇稀釋的700µl Wash Buffer清洗吸收柱，10000×g離心1min.注意：Wash Buffer濃縮液用前必須用純乙醇稀釋，方法見標(biāo)簽，如果經(jīng)過(guò)冷凍，用前必須恢復(fù)室溫。  

10.此步可選：再加700µl Wash Buffer清洗吸收柱。  

11.必須將吸收柱13000×g離心2min確保乙醇被去除，乙醇會(huì)影響下面的步驟。

12.將吸收柱放入干凈1.5ml離心管，加30-50µl(取決于需要的終濃度)無(wú)菌去離子水或TE緩沖液在濾膜上，13000×g離心1min，一次可洗脫75-80%附著DNA（可進(jìn)行再洗脫，但會(huì)降低DNA濃度）。 

13.檢測(cè)：方法A：分別在260nm和280nm波長(zhǎng)下測(cè)定20-50倍稀釋液的吸光度 DNA濃度＝260nm吸光度×50×稀釋因子μg/ml  高質(zhì)粒拷貝數(shù)能達(dá)到5ml培養(yǎng)液得到25μg DNA，如果260nm吸光度/280nm吸光度大于1.8，說(shuō)明核酸大于90%。  方法B：和預(yù)知濃度DNA樣品（Marker）一起做瓊脂糖凝膠/嗅乙啶電泳，對(duì)比結(jié)果    （通常情況得到的DNA是單體超螺旋，也有少量多聯(lián)體）

該試劑盒采用經(jīng)典的堿裂解法和硅膠柱純化方式，適合于從1.5-5.0ml培養(yǎng)過(guò)夜的大腸桿菌(DH5α, JM109)等菌液中抽提5-35µg高純度的質(zhì)粒DNA。操作者可在30分鐘內(nèi)完成多個(gè)樣品的質(zhì)粒提取工作。純化的質(zhì)?？梢灾苯佑糜谧詣?dòng)測(cè)序、限制性內(nèi)切酶酶切、PCR、標(biāo)記等實(shí)驗(yàn)。從1.5-5.0ml培養(yǎng)過(guò)夜的菌液中收集細(xì)菌后，采用經(jīng)典的堿裂解法裂解細(xì)菌，離心去除染色體DNA和蛋白質(zhì)，上清液轉(zhuǎn)移至硅膠柱，離心吸附質(zhì)粒DNA，經(jīng)兩種溶液洗滌去除殘余蛋白質(zhì)和各種雜質(zhì)，zui后用Elution Buffer洗脫出質(zhì)粒DNA。

標(biāo)簽：Plasmid Mini Kit I(200)    質(zhì)粒小量提取試劑盒I型     質(zhì)粒小量提取試劑盒