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中級(jí)會(huì)員 | 第12年

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PCR實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)

時(shí)間:2023/12/5閱讀:413
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  實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng):盡管擴(kuò)增序列的殘留污染大部分是假陽(yáng)性反應(yīng)的原因,樣品間的交叉污染也是原因之一。因此,不僅要在進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)是謹(jǐn)慎認(rèn)真,在樣品的收集、抽提和擴(kuò)增的所有環(huán)節(jié)都應(yīng)該注意:

  (1)戴一次性手套,若不小心濺上反應(yīng)液,立即更換手套。

  (2)使用一次性吸頭,嚴(yán)禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用,吸頭不要長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中,避免氣溶膠的污染。

  (3)避免反應(yīng)液飛濺,打開(kāi)反應(yīng)管時(shí)為避免此種情況,開(kāi)蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上,應(yīng)立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面。

  (4)操作多份樣品時(shí),制備反應(yīng)混合液,先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好,然后分裝,這樣即可以減少操作,避免污染,又可以增加反應(yīng)的精確度。

  (5)最后加入反應(yīng)模板,加入后蓋緊反應(yīng)管。

  (6)操作時(shí)設(shè)立陰陽(yáng)性對(duì)照和空白對(duì)照,即可驗(yàn)證PCR反應(yīng)的可靠性,又可以協(xié)助判斷擴(kuò)增系統(tǒng)的可信性。

  (7)盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器,由于加樣器最容易受產(chǎn)物氣溶膠或標(biāo)本DNA的污染,最好使用可替換或高壓處理的加樣器。如沒(méi)有這種特殊的加樣器,至少PCR操作過(guò)程中加樣器應(yīng)該專用,不能交叉使用,尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個(gè)區(qū)。

  (8)重復(fù)實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證結(jié)果,慎下結(jié)論。

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