酸性磷酸酶(ACP)檢測試劑盒(Folin-酚比色法)

簡介：酸性磷酸酶 (acid phosphatase , ACP) 分布極廣泛,遍布各種組織,主要存在于細(xì)胞的溶酶體內(nèi)，所以常作為溶酶體標(biāo)志酶。溶酶體外的酸性磷酸酶存在于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和胞質(zhì)內(nèi)，各種動物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的適宜pH為4.5～5.5。酸性磷酸酶是一個蛋白家族。

檢測原理是以磷酸苯二鈉作為底物，在酶促反應(yīng)的適條件下采用每隔一定時間測定產(chǎn)物生成量的方法，通過Folin-酚(又稱福林酚)顯色，于分光光度計680nm處檢測吸光度，以酶促反應(yīng)時間為橫坐標(biāo)以產(chǎn)物生成量為縱坐標(biāo)繪制進(jìn)程曲線。曲線的起始部分在某一段時間內(nèi)呈直線。該試劑盒主要用于組織的裂解液或勻漿液、血漿、血清、尿液等樣品中內(nèi)源性的酸性磷酸酯酶活性。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。
 

組成：
試劑(A):Phenol(10mM)  1ml
試劑(B):樣品稀釋液    100ml
試劑(C):ACP assay buffer  15ml
試劑(D):ACP終止液   100ml
試劑(E):Folin-酚顯色液  15ml
使用說明書  1份

自備材料：蒸餾水;離心管或試管;水浴鍋;比色杯;分光光度計

操作步驟（僅供參考）：
1、準(zhǔn)備樣品：
① 血漿、 血清和尿液樣品: 血漿、 血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒，尿液通常也可以直接用于測定，-20℃凍存，用于酸性磷酸酯酶的檢測。
②細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液，如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿，離心取上清，-20℃凍存，用于酸性磷酸酯酶的檢測。
③植物樣品：取適量的植物組織加入少量生li鹽水或PBS，充分搗碎或研磨，靜置，用紗布或濾紙過濾，留取上請液并測量體積，-20℃凍存，用于酸性磷酸酯酶的檢測。
④高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的酸性磷酸酶，可以使用樣品稀釋液稀釋10-20倍。

2、稀釋標(biāo)準(zhǔn)品
加入物                1     2      3       4      5
phenol（10mM）（ul）  50   100    150     200     250
蒸餾水（ul）          450   400   350     300     250
phenol濃度（mM）      0.04   0.08   0.12   0.16   0.2

3、ACP加樣：按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、測定管、對照管(選做)，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的酸性磷酸酯酶活性過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。樣品的檢測hao能設(shè)置2平行管，求平均值。

4、ACP檢測：分光光度計，空白管調(diào)零，比色杯光徑1.0cm，檢測680nm處吸光度。

計算：根據(jù)測得的各待測樣品的吸光度，于標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的酚含量，乘以稀釋倍數(shù)后，換算為”nmol/ml·min”的活性單位。組織或植物粗酶液獲得率(ml)=上清液體積(ml)/組織或植物質(zhì)量×100%

注意事項：
1、待測樣品中不能含有磷酸酶抑制劑，同時需避免反復(fù)凍融。
2、建議每次測定時都做標(biāo)準(zhǔn)曲線，以使標(biāo)準(zhǔn)更準(zhǔn)確，另外標(biāo)準(zhǔn)品需避免反復(fù)凍融。
3、如果沒有分光光度計，也可以使用普通的酶標(biāo)儀測定。
4、所測樣本的值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限，應(yīng)用ACP Assay buffer稀釋樣品后重新測定。
5、待測樣品中酸性磷酸酶活性較低時，可適當(dāng)延長孵育時間至30min。
6、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期：6個月有效期。