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127次1.蛋白酶K:
能水解消化蛋白質(zhì),特別是與DNA結(jié)合的組蛋白。再尿素和SDS中穩(wěn)定。一般工作濃度是50—100μg/ml,推薦反應緩沖液:50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2。
2.SDS:
十二烷基硫酸鈉. 溶解細胞膜上的脂類與蛋白質(zhì),因而溶解膜蛋白而破壞細胞膜,并解離細胞中的核蛋白,SDS 還能與蛋白質(zhì)結(jié)合而沉淀
3.IPTG
異丙基-β-D-硫代半乳糖苷, 常用于藍白斑篩選及IPTG誘導的細菌內(nèi)的蛋白表達等. IPTG和乳糖的結(jié)構相似,所以它和乳糖一樣,可以與乳糖操縱元的阻遏蛋白結(jié)合,使阻遏蛋白的空間構像變化,四聚體解聚成單體,失去與操縱子特異性結(jié)合的能力,從而解除了阻遏蛋白的作用,使其后的基因得以轉(zhuǎn)錄合成利用乳糖的酶類。與乳糖不同的是,IPTG不被 β-半乳糖苷酶水解。常與X-GAL一起用于藍白斑篩選。作用*的誘導劑,不被細菌代謝而十分穩(wěn)定
4.X-gal
5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷,是IPTG的顯色試劑,在IPTG的催化下顯藍色。常跟IPTG一起用與藍白斑篩選。
5.G418:
一種抗生素,對幾乎所有的細胞都有毒性,是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染常用的選擇試劑。當neo基因被整合進真核細胞基因組合適的地方后 ,則能啟動neo基因編碼的序列轉(zhuǎn)錄為mRNA,從而獲得抗性產(chǎn)物氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶的表達 ,使細胞獲得抗性而能在含有G418的選擇性培養(yǎng)基中生長。G418的這一選擇特性 ,已在基因轉(zhuǎn)移、基因敲除、抗性篩選以及轉(zhuǎn)基因動物等方面得以廣泛應用。
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