人肺癌細胞 A-427細胞 豬瘟病毒核酸擴增檢測試劑盒

使用方法:
1.DNA提取
1.1樣品處理    
血清或病毒液：取液體標本約50μl，轉至1.5ml潔凈離心管中，加50μl核酸提取液B充分混勻(提取液用前需室溫溶解并充分混勻)后100℃10分鐘，13,000rpm離心3分鐘，取上清液3μl進行PCR擴增。
肺、脾、腎、腸系膜及額下淋巴結等固體組織：取約200mg固體組織，用生理鹽水洗凈表面殘余血液，轉至研磨器中，加1ml生理鹽水，研磨成組織勻漿，取50μl組織勻漿液轉至1.5ml潔凈的離心管中，加50μl核酸提取液B（內含不溶物質，用前需室溫溶解并充分混勻），充分混勻，100℃裂解10min，4℃13,000g離心3min，取上清液3μl進行PCR擴增。
陰性質控品：取50μl陰性質控品，加50μl核酸提取液B充分混勻(提取液用前需室溫溶解并充分混勻)后100℃10分鐘，13,000rpm離心3分鐘，取上清液3μl進行PCR擴增。
ASFV陽性質控品：直接取4μl進行PCR擴增。或按照PCR擴增介紹方法進行定量分析。
2．PCR擴增
從試劑盒中取出ASFV–PCR MIX、Taq酶系，室溫融化并振蕩混勻后，10,000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N（N=樣本數+1管陰性對照+4管陽性對照），每個測試反應體系配制如下表：
人肺癌細胞 A-427細胞 試劑    ASFV–PCR MIX    Taq酶系
用量    24μl    2μl

豬瘟病毒(ASFV)核酸擴增檢測試劑盒 適用于檢測豬血清、肺、脾、腎、腸系膜及額下淋巴結等組織標本或病毒培養液中非洲豬瘟病毒(ASFV)DNA，適用于豬瘟病毒感染的輔助診斷及流行病學調查。其檢測結果僅供參考。
試劑盒用一對非洲豬瘟病毒(ASFV)特異性引物和一條特異性熒光探針，應用堿裂解法裂解提取DNA，后者在Taq酶作用下，配以FQ-Buffer(內含Mg2+、Tris-HCl等)、四種核苷酸單體（dNTPs）等成分，通過PCR-熒光探針法對非洲豬瘟病毒(ASFV)DNA進行擴增，從而達到實時快速定量檢測之目的。

人肺癌細胞 A-427細胞 適用標本類型：豬血清、肺、脾、腎、腸系膜及額下淋巴結等組織標本或病毒培養液等。

標本采集:
豬肺、脾、腎、腸系膜及額下淋巴結等組織：采集可疑病死豬或捕殺病豬疑似組織約1g左右，置入1.5ml潔凈EP管，立即送檢。

血清:用一次性無菌注射器抽取受檢豬耳靜脈或者前腔靜脈靜脈血2-5ml，靜置斜放待血清析出， 1,0000rpm離心3分鐘，可取上清立即用于測試；或吸取上部血清(約500μl)轉入無菌1.5ml Eppendoff管，立即送檢。

計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10,000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入26μl，向每管中加入處理后樣品(所獲得的逆轉錄產物)或陰性質控品、ASFV陽性定量標準品(使用前用陰性質控品梯度稀釋10倍、100倍、1000倍，記為1×10P6PCopies/ml，1×10P5PCopies/ml，1×10P4PCopies/ml)和陰性質控品4μl，10,000rpm瞬時離心30秒。將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內，按對應順序設置陰性控品，陽性質控品以及未知標本，并設置反應體積(30μl)、樣品名稱、標記熒光基團種類(報告基團為FAM，淬滅基團為TAMRA)和循環條件：
ABI PRISM 7700，ABI PRISM5700，ABI GeneAmp 7000 (需要剪掉反應蓋)，ABI PRISM7300/7500(使用8聯管)，MJ Opticon(使用8聯管)等使用薄壁管的儀器，循環條件：94℃→2分鐘，后93℃ 30秒→55℃ 45秒，共40個循環。
LightCycler等使用毛細管的儀器，循環條件：94℃→2分鐘，后93℃ 5秒→56℃ 45秒，共40個循環。

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