小鼠胚胎成纖維細胞 PA12細胞 本試劑盒采用酶聯免疫間接法原理定性檢測人血清中的人類巨細胞病毒IgG抗體(HCMV-IgG),以純化人類巨細胞病毒抗原包被酶聯板。待檢血清中的人類巨細胞病毒抗體與包被抗原反應,再與酶標記鼠抗人IgG抗體結合,形成抗原-抗體-酶標抗體復合物。加底物TMB顯色,在酶標儀上比色后根據吸光度(A值)判定有無人類巨細胞病毒IgG抗體的存在。
使用方法:
取出試劑盒置室溫平衡30分鐘。將20×洗滌液用蒸餾水做20倍稀釋。加樣品:將待檢血清做1:10稀釋(取100μl標本稀釋液加入反應板孔內,再加10μl待檢血清)混勻,同時預留陰、陽性及空白對照共5孔。
加入陰性對照3孔,陽性對照1孔,各100μl對照血清。空白對照1孔空置。將反應板輕輕震蕩使樣品混勻。溫育:用封板膜封板后,置37℃溫箱或水浴中反應30分鐘。
洗板:溫育后,將封板膜揭掉,吸干孔內液體,用洗滌液洗板5次,每次浸泡30-60秒鐘。加酶標工作液:每孔加入100μl酶標工作液,空白孔除外。溫育:用封板膜封板后,置37℃溫箱或水浴中反應30分鐘。
洗板:溫育后,將封板膜揭掉,吸干孔內液體,用洗滌液洗板5次,每次浸泡30-60秒鐘。顯色:每孔加底物A、B液各50μl,輕輕震蕩混勻,用封板膜封板后,置37℃溫箱或水浴中反應10分鐘。
終止:每孔加入終止液50μl,輕輕震蕩混勻。測定:設定酶標儀波長于450nm(建議雙波長450/630nm檢測),測定各孔A450值。注意:在終止反應30分鐘內讀數。
當使用單波長時,校準空白孔,設定酶標儀波長于450nm,測定各孔A450值,當使用雙波長450/630nm檢測時,可以不設空白孔,測定各孔A值。
小鼠胚胎成纖維細胞 PA12細胞 標本采集:
適用標本類型:血清或血漿。血清中的內源性干擾物如血脂、膽紅素、血紅蛋白在通常情況下不會影響實驗結果。RF因子陽性、孕婦、AFP陽性標本不影響實驗結果,HAV、HCV、乙肝等相關疾病抗體陽性標本通常情況下不影響實驗結果。
標本采集:
血清:用一次性無菌注射器抽取受檢者靜脈血2ml,注入一5ml無菌的干燥玻璃管中(或含有促凝劑),室溫放置30min,2,000rpm離心3min,吸取上層血清,轉移至一潔凈的1.5ml離心管中,密閉送檢。血清樣本中混濁或有沉淀的樣本應先離心或過濾后取澄清的液體進行檢測,如果未充分沉淀,懸浮的纖維蛋白可能引起假陽性。
血漿:用一次性無菌注射器抽取受檢者靜脈血2ml,注入一5ml無菌的含有Na2EDTA或枸櫞酸鈉抗凝劑的玻璃管中立即輕輕顛倒玻璃管混勻5-10次以充分混勻,室溫放置30min,2,000rpm離心3min,吸取上層血漿,轉移至一潔凈的1.5ml離心管中,密閉送檢。標本中含有EDTA、檸檬酸鈉、肝素鈉等抗凝劑時,不影響結果。
小鼠胚胎成纖維細胞 PA12細胞 標準:
空白孔(只加顯色劑和終止液)的吸光度值應不大于0.08.陽性對照(PC)A450值大于0.30.陰性對照平均A450值小于0.08,如果質控是有效的,實驗結果就是有效的。
結果判定:
每個實驗結果獨立使用,通過(Cut off)值判定結果。計算臨界值:Cut off (C.O) =0.10+陰性對照平均(NC)A450值(當陰性平均A450值小于0.05時,按0.05計算;當陰性平均A450值大于或等于0.05時按實際值計算)。
陰性結果:標本吸光度值﹤臨界值為陰性。陽性結果:標本吸光度值≧臨界值為陽性。
試劑盒規格:
組份名稱 規格及數量(48T) 規格及數量(96T)
HCMV-Ag包被板 48孔板條 96孔板條
陽性對照 1支0.5ml 1支0.5ml
陰性對照 1支0.5ml 1支0.5ml
標本稀釋液 1瓶6.0ml 1瓶12ml
酶標工作液 1瓶6.0ml 1瓶12ml
濃縮洗滌液(20×) 1瓶30ml 1瓶50ml
底物A液 1瓶3.0ml 1瓶6.0ml
底物B液 1瓶3.0ml 1瓶6.0ml
終止液 1瓶3.0ml 1瓶6.0ml
自封袋 1個 1個
封板膜 3張 3張
說明書 1份 1份
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