人肺癌細胞 A549細胞傳代細胞 細胞信息（說明書，鑒定書),售后情況，細胞活動請 :
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復(fù)蘇細胞下單后的1-2周內(nèi)到貨，凍存細胞2天內(nèi)到貨
多孔塑料培養(yǎng)板單細胞克隆法：
消化：取健康待克隆細胞，吸出瓶內(nèi)培養(yǎng)液，加消化液。
低密度細胞懸液的制備：做克隆細胞時首先需先用消化法制備出分散成單個細胞懸液，然后稀釋細胞,使之成為1~2細胞/毫升懸液，zui適宜細胞密度為 1~2 細胞/ml 培養(yǎng)液。
接種：先用吸管輕輕吹打細胞懸液，使混懸均勻，繼用加樣器向塑料培養(yǎng)板每孔內(nèi)
加0.5毫升。接種時要迅速準確，爭取在zui短時間內(nèi)加完，以免培養(yǎng)液蒸發(fā)，然后迅速蓋好
蓋板，置CO2溫箱培養(yǎng)。
標記：培養(yǎng)6~12小時后，待細胞下沉冰貼附于培養(yǎng)板孔底后，從溫箱中取出，置
倒置光顯微鏡臺上，觀察和標記下含有單個細胞的孔，置 CO2 溫箱培養(yǎng)。在培養(yǎng)中一般無
需換液，只有在細胞增長過于緩慢時才可進行換液。換液時先吸除舊培養(yǎng)基，但不要吸除過
多，余少許，以免細胞干涸。然后再迅速補加新鮮克隆培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng) 3~4 周。待孔內(nèi)細
胞增至500~600個時，可進行分離培養(yǎng)。
人肺癌細胞 A549細胞傳代細胞 分離擴大培養(yǎng):培養(yǎng)86~96小時后進行觀察。挑選生長良好的單細胞克隆孔，先吸
除舊培養(yǎng)液，用Hanks洗1~2次，繼加胰蛋白酶少許，加入量已能覆蓋細胞群即可，如過
多，應(yīng)吸除多余消化液。置于倒置顯微鏡下窺視，待發(fā)現(xiàn)細胞變圓時，加入0.1ml含 10%血
清的克隆培養(yǎng)基,用吸管輕輕吹打,當細胞離開底物懸浮后,一并吸入管內(nèi)，移入另瓶或皿
中，再補加一定量克隆培養(yǎng)液,置CO2溫箱中繼續(xù)培養(yǎng).增殖.使之形成新的細胞群后，
即轉(zhuǎn)用常規(guī)培養(yǎng)法培養(yǎng)。
必須保證分離出來的細胞確為一個而不是兩個或更多。因此必須提高克隆形成率才易克隆成功，為此常采取以下一些措施：使用適應(yīng)性培養(yǎng)基或條件培養(yǎng)基（Conditional Medium）。制備方法：
培養(yǎng)同源細胞（未克隆前時的同一細胞）至半?yún)R合狀態(tài)時，更換一次培養(yǎng)液，再繼續(xù)培養(yǎng) 24~48 小時后，吸出所有培養(yǎng)液。
離心：3000~4000/分離心 10 分鐘，吸取上清液。濾過：再經(jīng)直徑 0.22μm 濾孔的濾膜過濾，低溫凍存貯備用；用時取 1 分適應(yīng)培養(yǎng)基+2 分培養(yǎng)基混合使用。使用飼細胞(Feeder Cells)。制備方法：
人肺癌細胞 A549細胞傳代細胞 取原代培養(yǎng)的人或動物胚胎成纖維細胞，90%匯合時制成細胞懸液，再按 105 細胞/毫升重新接種培養(yǎng)。
在細胞半?yún)R合時，準備 0.25μg/ml 的絲裂霉素 C，按 2μg/106 細胞的量加入到培養(yǎng)瓶中過夜；或用射線單次照射，劑量 30～50 戈瑞。細胞經(jīng)上述處理后，Hanks 液漂洗兩次、更換培養(yǎng)液、再培養(yǎng) 24 小時，胰蛋白酶消化細胞制成懸液，按 5×104（104 細胞/cm2）接種入新培養(yǎng)基中。 48 小時后，即可用于細胞克隆之用。
底物特殊處理：
制備濃度為 1 mg/ml 的多聚右旋賴氨酸的水溶液，用以濕潤培養(yǎng)瓶底。倒出多聚賴氨酸溶液，用 5ml PBS 沖洗一次后，可立即使用，或存數(shù)周內(nèi)使用。
細胞詳細信息：
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人肺腺鱗癌細胞 NCI-H596細胞
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人肺鱗癌細胞 LTEP-s細胞
人小細胞肺癌細胞 LTEP-sm細胞
人肺鱗癌瘤株 LTEP-s細胞
人肺鱗癌細胞 NCI-H1703細胞
人肺鱗癌細胞 NCI-H2170細胞
人非小細胞肺癌細胞 NCI-H524細胞
人肺腺癌細胞 SPC-A1細胞
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