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傳代細胞 *

時間:2015/5/21閱讀:1016
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無菌操作
無菌室的滅菌:
1.定期打掃無菌室:每周打掃一次,先用自來水拖地、擦桌子、超凈工作臺等,然后用3‰來蘇爾或者新潔爾滅或者0.5%過氧乙酸擦拭。
2.CO2孵箱(培養箱)滅菌:先用3‰新潔爾滅擦拭,然后用75%酒精擦拭或者0.5%過氧乙酸,再用紫外燈照射
3.實驗前滅菌:打開紫外燈、三氧殺菌機、空氣凈化器系統各20-30分鐘
4.實驗后滅菌:用75%酒精(3‰新潔爾滅)擦拭超凈臺、邊臺、倒置顯微鏡的載物臺。
實驗人員的無菌準備:
1.肥皂洗手。
2.穿好隔離衣、帶好隔離帽、口罩、放好拖鞋
3.用75%酒精棉球擦凈雙手。
無菌操作的演示:
1.凡是帶入超凈工作臺內的酒精、PBS、培養基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表面
2.靠近酒精燈火焰操作。
3.器皿使用前必須過火滅菌
4.繼續使用的器皿(如瓶蓋、滴管)要放在高處,使用時仍要過火。
5.各種操作要靠近酒精燈,動作要輕、準確,不能亂碰。如吸管不能碰到廢液缸。
6.吸取兩種以上的使用液時要注意更換吸管,防止交叉污染。


平底和圓底(U型和V型)培養板的區別和選擇:
貼壁細胞一般用平底培養板。
懸浮型細胞的培養一般用V型。

U型培養板亦多用于培養懸浮型細胞 。

V型培養板有時用做免疫學血凝集的實驗。
不同型狀的板子自然有不同用途。平底的什麼類型的細胞都可用﹐但當細胞數目較少﹐如做克隆時﹐就用96孔平底板﹐另外﹐做MTT等實驗時﹐無論貼壁和懸浮細胞﹐一般均用平底板。至於U或V型板﹐一般在某些特殊要求時才使用。

免疫學方面﹐當做兩種不同淋巴細胞混合培養時﹐需要二者相互接觸以刺激﹐因此﹐一般需要U型板﹐因細胞會由於重力的作用而聚集在一個很小的范圍內。
V型板的用途更少﹐一般用于細胞殺傷實驗時﹐為了使效靶細胞緊密接觸﹐常使用V型板﹐但這種試驗也可用U型板替代(加入細胞后﹐低速離心)
如果是養細胞的話, 通常是選用平底的, 另外要特別注意材質, 標示%26quot;Tissue Culture (TC) Treated%26quot;就是養細胞用的。
圓底的好像沒聽說過拿來養細胞。 圓底的通常是拿來做分析, 化學反應, 或是保存樣品用的, 因為圓底比較好將液體吸得乾凈, 如果用平底的就不好吸了。 不過, 如果你是要測吸光值的話, 一定要買平底的才行。

常用設備

準備室的設備:
單蒸餾水蒸餾器、雙蒸餾水蒸餾器、酸缸、烤箱、高壓鍋、儲品柜(放置未消毒物品)、儲品規(放置消毒過的物品)、包裝臺。配液室的設備:扭力天平和電子天平(稱量藥品)、PH計(測量培養用液PH值)、磁力攪拌器(配置溶液室攪拌溶液)。
培養室的設備:
液氮罐、儲品柜(存放雜物)、日光燈和紫外燈、空氣凈化器系統、低溫冰箱(-80℃)、空調、二氧化碳缸瓶、邊臺(書寫實驗記錄)。必須放在無菌間的設備:離心機(收集細胞)、超凈工作臺、倒置顯微鏡、CO2孵箱(孵育培養物)、水浴鍋、三氧消毒殺菌機、4℃冰箱(放置serum和培養用液)。

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