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定期移植法 斜面的制備
酵母菌保藏一般用5oBé麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基或YEPD培養(yǎng)基，其它特殊培養(yǎng)基可另行配制。
ATCC細(xì)胞,傳代細(xì)胞,BD培養(yǎng)基,菌種
將斜面放入培養(yǎng)箱中，30℃培養(yǎng)1～3天。無(wú)菌落長(zhǎng)出后將斜面保存于4℃。空白斜面應(yīng)盡快使用。
YEPD培養(yǎng)基
培養(yǎng)基組成
酵母提取物10g
蛋白胨 10g
葡萄糖 20g
自來(lái)水 1000mL
瓊脂 15～20g
PH值 自然
配制過(guò)程
在燒杯中放入約500mL水，按要求稱量各種藥品，依次放入燒杯中溶解，zui后補(bǔ)足1000mL。
按所述制備空白斜面。
接種
打開(kāi)超凈臺(tái)或無(wú)菌間的紫外燈滅菌20～30分鐘。關(guān)閉紫外燈，用75%酒精擦拭操作臺(tái)面進(jìn)行消毒。點(diǎn)燃酒精燈，用75%酒精擦手進(jìn)行消毒。一只手夾住原菌種平板或試管及待轉(zhuǎn)接斜面試管(斜面朝上)，另一只手將棉塞從試管口拔出，操作應(yīng)在火焰無(wú)菌區(qū)域進(jìn)行。
在火焰上將接種針的金屬絲部分燒紅滅菌，然后將要伸入試管部分的針柄也反復(fù)通過(guò)火焰滅菌。將接種針?biāo)酵ㄟ^(guò)火焰并插入原菌試管或平皿內(nèi)，先在管壁上或未長(zhǎng)菌體的培養(yǎng)基表面冷卻，然后再用接種針輕輕沾取少量菌體，將接種針自原菌種試管或平皿內(nèi)抽出，抽出時(shí)勿碰管壁，也勿通過(guò)火焰。
在火焰旁將沾有菌體的接種針迅速伸入待接空白斜面試管內(nèi)，自斜面底部向上劃一直線，使菌體沾附在斜面培養(yǎng)基上。劃線時(shí)盡量不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基表面。接完種后將接種針由試管內(nèi)抽出，同時(shí)將試管口在火焰上灼燒一下，塞上棉塞。
注意不要用試管口去迎棉塞，以免試管口在移動(dòng)時(shí)造成污染。
接種針在放回原處前應(yīng)在火焰上*滅菌。放下接種針后，再用右手將棉塞進(jìn)一步塞牢，避免脫落。zui后將已接種好的斜面試管放在試管架上。接種完畢后及時(shí)在試管上標(biāo)明菌株編號(hào)和日期，也可在接種之前標(biāo)明。
培養(yǎng):將接完種的斜面放入培養(yǎng)箱中，28～30℃條件下進(jìn)行培養(yǎng)3天。特殊菌種可在其zui適條件下培養(yǎng)至穩(wěn)定期。
保藏:培養(yǎng)好的斜面于4～6℃保存，根據(jù)不同要求每3～6個(gè)月移植一次。對(duì)于某些菌種，如芽裂酵母，阿舒假囊酵母，棉病囊霉等，必須1～3個(gè)月移植一次。
保藏濕度用相對(duì)濕度表示，通常為50%～70%。 微生物菌種保藏期間，要定期檢查菌種存放設(shè)施的溫度和濕度、菌株有無(wú)污染、棉塞有無(wú)霉變，如發(fā)現(xiàn)異常應(yīng)重新移植培養(yǎng)后更換。每株菌種應(yīng)保藏相繼的三代培養(yǎng)物，以便對(duì)照，也可減少因意外和污染造成的損失。
菌種的移植:將斜面培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到另一空白斜面上，在適宜條件下進(jìn)行培養(yǎng)。微生物菌種移植過(guò)程，要對(duì)菌株編號(hào)及培養(yǎng)基分別進(jìn)行核對(duì)，避免發(fā)生錯(cuò)誤。微生物菌種移植培養(yǎng)后，應(yīng)與原保藏菌株的培養(yǎng)特征和菌株登記信息對(duì)照，檢查無(wú)誤后再存放。
5oBé麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基
稱取一定量的大麥芽粉，加入4倍量溫度為60℃的清水，在55℃水浴鍋中保溫糖化4～6小時(shí)，并間歇性攪拌。用玻璃棒蘸一滴糖化液于白色比色盤(pán)內(nèi)與碘液反應(yīng)，碘呈色反應(yīng)為無(wú)色時(shí)糖化完畢。
用紗布過(guò)濾，將濾液煮沸，再用紗布或脫脂棉過(guò)濾，得到澄清的麥芽汁。或于糖化液中加入適量蛋清（每500g大麥芽粉的糖化液加入一個(gè)雞蛋的蛋清），煮沸，過(guò)濾，也可得到清澈透明的麥芽汁。
用波美計(jì)測(cè)量麥芽汁濃度（一般為8～10oBé），加水稀釋成5oBé的麥芽汁，pH值自然。按1.5%～2%比例加入瓊脂，煮沸使瓊脂溶解，補(bǔ)足所蒸發(fā)水分。
將培養(yǎng)基趁熱分裝，每管分裝量約為試管高度的四分之一（4～5mL）。分裝過(guò)程中，應(yīng)注意勿使培養(yǎng)基沾污管口，以免造成污染。
分裝好的試管加棉塞或橡膠塞，外面包扎一層牛皮紙并注明培養(yǎng)基名稱及配制日期。121℃蒸汽滅菌15～20分鐘。滅菌后及時(shí)擺放斜面，斜面長(zhǎng)度不超過(guò)試管管長(zhǎng)的二分之一為宜。
