菌種 保藏法  : :  :tongpaibio   

保藏:立即將預(yù)凍后的冷凍管轉(zhuǎn)移至處于液氮中的儲(chǔ)存器中，置于液態(tài)氮的氣相或液相保藏。一般氣相中溫度為－150℃，液相中溫度為－196℃。用此法可保藏酵母菌5～8年。

ATCC細(xì)胞,傳代細(xì)胞,菌種

恢復(fù)培養(yǎng):將冷凍管立即放置38～40℃水浴中復(fù)蘇并適當(dāng)快速搖動(dòng)，直到內(nèi)部結(jié)冰全部溶解為止，整個(gè)復(fù)蘇過(guò)程約需50～100秒。
用75%酒精棉擦拭冷凍管。將冷凍管蓋子旋開(kāi)，無(wú)菌條件下將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移至麥芽汁或其它適宜培養(yǎng)基上，28～30℃或適溫下培養(yǎng)。

注意事項(xiàng):
操作時(shí)要注意安全，帶防護(hù)面罩和手套，防止凍傷。
冷凍管于液相中存放時(shí)一定要擰緊螺帽。
運(yùn)送液氮時(shí)要用特制的容器，絕不可用密閉容器存放或運(yùn)輸液氮，切勿使用保溫瓶存放液氮。
注意存放液氮容器的室內(nèi)通風(fēng)，防止過(guò)量氮?dú)馐谷酥舷ⅰ?br>防止冷凍管破裂爆炸，如液氮滲入管內(nèi)，當(dāng)從液氮容器取出時(shí)，液態(tài)氮體積膨脹約680
倍，爆炸力很大，要特別小心。
注意觀察液氮容器中液氮的殘存量，定期補(bǔ)充液氮。

菌種 保藏法  液氮超低溫凍結(jié)法  

安瓿管或冷凍管的準(zhǔn)備:
將1.8mL冷凍管洗凈，晾干.激光打印標(biāo)簽，標(biāo)簽上標(biāo)明菌株編號(hào)和保藏日期，大小約為10×20mm，標(biāo)簽在管內(nèi)的位置應(yīng)距離管底約10mm左右，標(biāo)簽上有字的一面面向管壁。也可直接將菌株編號(hào)和保藏日期直接噴碼在冷凍管表面。塞好棉塞或旋上蓋子，121℃蒸汽滅菌15～20分鐘，60℃烘干備用。

菌種 保藏法 保護(hù)劑的準(zhǔn)備:選用分析純甘油制備保護(hù)劑。用蒸餾水配制10%的甘油溶液作為保護(hù)劑， 每支試管分裝5mL，121℃蒸汽滅菌15～20分鐘。

保藏培養(yǎng)物的準(zhǔn)備:斜面培養(yǎng)物的制備，要求培養(yǎng)至靜止期或成熟期。無(wú)菌條件下將滅過(guò)菌的10%甘油5mL用無(wú)菌吸管注入到培養(yǎng)好的斜面中，用吸管刮取斜面上的菌體，注意不要將培養(yǎng)基刮破。將菌體與保護(hù)劑混勻后用吸管注入到冷凍管內(nèi)，每支分裝約1mL，菌懸液中細(xì)胞濃度應(yīng)不低于106個(gè)/mL。將冷凍管蓋子旋緊后放入凍結(jié)器內(nèi)。

預(yù)凍:可采用以下兩種方式進(jìn)行預(yù)凍：將控溫系統(tǒng)先預(yù)冷到4℃，再將盛有保藏物的冷凍管放入其中，以每分鐘1℃的降溫速率使溫度降至－35℃。將冷凍管置－20℃至－40℃冰箱中冷凍，1～2小時(shí)取出放入液氮罐中快速冷凍，這樣冷凍速率大約每分鐘下降1～1.5℃。