【實驗目的】
學習凱氏定氮法的原理和操作技術。
【實驗原理】
凱氏定氮法用于測定有機物的含氮量,若蛋白質的含氮量已知時，則可用此法測定樣品中蛋白質的含量。
當蛋白質與濃硫酸共熱時，其中的碳、氫兩元素被氧化成二氧化碳和水，而氮則轉變成氨，并進一步與硫酸作用生成硫酸銨。此過程通常稱為“消化"。
但是，這個反應進行得比較緩慢，通常需要加入硫酸鉀或硫酸鈉以提高反應液的沸點，并加入硫酸銅作為催化劑，以促進反應的進行。ATCC細胞
消化完成后，在凱氏定氮儀中加入濃堿，可使消化液中的硫酸銨分解，游離出氨，借助水蒸汽蒸餾法，將產生的氨蒸餾到一定量、一定濃度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后，氨與溶液中氫離子結合，使溶液中的氫離子濃度降低，指示劑顏色改變，然后用標準無機鹽酸滴定，直至恢復溶液中原來的氫離子濃度為止。ATCC細胞
根據所用標準鹽酸的量可計算出待測物中的總氮量。
蛋白質的含氮量為16%，即1克蛋白質中的氮相當于6.25克蛋白質，用凱氏定氮法測出的含氮量乘以6.25,即得樣品中蛋白質的含量。
【實驗材料】
1.實驗器材
微量凱氏定氮儀 1套；50ml凱氏燒瓶 4個；移液管；錐形瓶；試管；小玻璃珠
2.試驗試劑
(1) 濃硫酸；30％氫氧化鈉溶液；2％硼酸溶液；標準鹽酸溶液(0.01mol／L)。
(2) 粉末硫酸鉀—硫酸銅混合物 ：K2SO4與CuSO4·5H2O以3：1配比研磨混合。
(3)混合指示劑(田氏指示劑)：由50ml 0.1％甲烯藍乙醇溶液與200ml 0.1％甲基紅乙醇溶液混合配成，貯于棕色瓶中備用。ATCC細胞
(4) 樣品溶液：配制3mg/ml的牛血清白蛋白溶液作為樣品。
【實驗操作】
1.安裝凱氏定氮儀。
2.消化：取4個50ml凱氏燒瓶并標號,各加1顆玻璃珠，在1號及2號瓶中各加樣品1ml，催化劑(K2SO4- CuSO4·5H2O)200 mg，濃硫酸5 ml。注意加樣品時應直接送入瓶底，而不要沾在瓶口和瓶頸上。在3號及4號瓶中各加1 ml蒸餾水和與1、2號瓶相同量的催化劑和濃硫酸，作為對照。在通風櫥內進行消化。
在消化開始時應控制火力，不要使液體沖到瓶頸。待硫酸開始分解并放出SO2白煙后，適當加強火力，繼續消化，直至消化液呈透明淡綠色為止。撤掉火力，冷卻至室溫。
