細胞凍存的步驟是什么?

時間：2021/7/20閱讀：7049

　　細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。

　　細胞凍存的步驟：

　　1、選擇活力好，密度約80%的細胞，此時細胞處于對數(shù)生長期，比較適合凍存。細胞凍存依舊分為貼壁細胞凍存和懸浮細胞凍存。

　　2、顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),若細胞密度較高，培養(yǎng)基變黃，需要換液4h之后再進行凍存操作，細胞長滿后，將培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基用槍小心的吸去。再用PBS沖洗一到兩次,盡量吸干凈潤洗的PBS，加入胰酶消化細胞,消化一定要注意控制胰酶作用時間，消化細胞時由于每個細胞貼壁性不一樣，消化時間差別會很大,胰酶消化是需要比較精細的操作，既要充分消化下細胞打散成單細胞懸液，均勻接種，又要避免消化過度造成細胞嚴重受損。大家用的胰酶活力及消化步驟、試劑都是不一樣的，所以不能*規(guī)定消化時間，一般儀個人經(jīng)驗為準。

　　對于消化這步，建議按照下述操作：胰酶首先復溫到室溫后加入細胞，放入37℃培養(yǎng)箱，然后每隔30秒，吹打下細胞，如果能夠吹打散細胞，說明細胞消化完成可以終止消化，之后混勻細胞時盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡。如果30秒不能分散，則再等30秒重復操作。

　　3、消化完成后加6-8ML*培養(yǎng)基終止消化，混勻細胞，收集細胞懸液。

　　4、900-1000rpm離心3分鐘，棄上清,加入配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml,在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者,裝有細胞的凍存管放入-4℃冰箱10分鐘，然后放入-80℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。

　　5、24小時后取出一只凍存管復蘇，檢查活性及是否污染。

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