ACP核酸檢測(cè)(PCR熒光探針?lè)ǎ?
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簷z測(cè)動(dòng)物肺臟、淋巴結(jié)等組織中鸚鵡熱衣原體(ACP)DNA,用于鸚鵡熱衣原體(ACP)感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查。其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。
實(shí)驗(yàn)方法:選取一對(duì)ACP特異性引物和一條特異性熒光探針,應(yīng)用堿裂解法提取DNA,在耐熱DNA聚合酶(Taq酶)作用下,配以FQ-Buffer(內(nèi)含Mg2+、Tris-HCl等)、四種核苷酸單體(dNTPs)等成分,通過(guò)PCR-熒光探針體外擴(kuò)增法對(duì)鸚鵡熱衣原體(ACP)一段高保守區(qū)域進(jìn)行擴(kuò)增,從而達(dá)到快速實(shí)時(shí)定量檢測(cè)之目的。
動(dòng)物組織標(biāo)本采集:取發(fā)病動(dòng)物肺臟、淋巴結(jié)等組織1g左右,轉(zhuǎn)至1.5ml離心管中,密閉送檢。
提取組織:取約100mg組織加1ml生理鹽水,研磨成組織勻漿,取50ul勻漿液轉(zhuǎn)至一潔凈的1.5ml離心管中。
組織DNA提取:向標(biāo)本中加入50ul核酸提取液充分混勻,100℃烈解10min。13,000rpm 離心3min,取上清液4ul做PCR反應(yīng)。