水泡性口炎病毒(VSV)核酸檢測實驗
實驗標本類型：發病動物唾液、水泡液、血清、病毒細胞培養液以及淋巴結等組織；
實驗標本采集：
動物水泡液：無菌條件下水泡液500ul左右，置入1.5ml潔凈EP管。
動物淋巴結等固體組織：無菌條件下取上述組織1g左右，置入1.5ml潔凈EP管。
病毒細胞培養液：取500ul左右，置入1.5ml潔凈EP管。
血清：用5ml注射器無菌條件下取外周血3-5ml，置入5ml潔凈干燥管中。
實驗標本的保存和運輸：上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃。但不能超過6個月，標本運送應采用0℃冰壺。
實驗原理：選取一對水泡性口炎病毒(VSV)核蛋白基因保守序列特異性引物和一條特異性熒光探針，應用Trizol提取RNA，經逆轉錄酶作用將RNA轉錄成cDNA，后者在Taq酶作用下，配以FQ-Buffer(內含Mg2+、Tris-HCl等)、四種核苷酸單體（dNTPs）等成分，通過一步PCR-熒光探針體外擴增法對水泡性口炎病毒(VSV)RNA進行擴增，從而達到快速檢測之目的。
實驗目的：適用于檢測動物(豬、馬、驢、牛、羊等)唾液、水泡液、血清、淋巴結等病樣組織標本以及細胞培養液中水泡性口炎病毒(VSV)RNA，適用于水泡性口炎病毒(VSV)感染的輔助診斷及流行病學調查，其檢測結果僅供參考。
實驗樣品處理：
1：固體組織：取50mg左右組織用玻璃勻漿器勻漿或剪刀剪碎，加入500ul RNA提取液A（Trizol reagents），研磨或振蕩至勻漿狀，轉移到1.5ml的EP管中，室溫放置5min。
唾液、水泡液、血清樣品或病毒液：取100ul液體標本加入500μl RNA提取液A（Trizol reagents）充分震蕩，室溫放置5min。
2：加入100ul氯仿，用力震蕩15s，室溫靜置5min,4℃ 13,000rpm離心5min。
3：小心將上層水相轉移到干凈離心管中，加300ul無水乙醇，另加10ul RNA提取液B（內含不溶物，使用前室溫溶解并充分混勻），充分混勻，13,000rpm離心1min。
4：棄上清，加入500ul 75%的DEPC乙醇，充分混勻，13,000rpm離心1min，小心吸去大部分乙醇。
5：將提取管敞口在室溫空氣中干燥5min待乙醇揮發干凈，用20ul DEPC H2O溶解沉淀。
陰性質控品：取100ul陰性質控品加入500μl RNA提取液A（Trizol reagents）充分震蕩，室溫放置5min。后按2-5操作。
VSV-陽性質控品：直接取3μl進行PCR擴增。
