細胞：HBdSMC細胞
中文名稱：人膀胱平滑肌細胞
生長特性：貼壁
培養基：SMCM
凍存條件：50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
HBdSMC細胞傳代：
1）：細胞密度約80%時，吸出原培養瓶中的培養基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞（注意根據實際情況，把握消化時間）。
2）：鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處，即可肉眼可見細胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續消化）直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養基，輕輕吹打細胞層，把細胞層吹落，吹散。
3）：取部分細胞懸液轉移到新的培養皿中，添加適當的培養基，把細胞懸液打勻，于培養箱中培養。
4）：注意培養基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。
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基因分型(AIV)核酸檢測
逆轉錄 根據標本數取0.2ml DEPC 處理的PCR反應管，取出AIV -RT MIX室溫溶解，向反應管中每管加入7μl AIV-RT MIX，1μl逆轉錄酶系(使用前請10,000rpm瞬時離心30s)， 以及2μl 上述獲得的RNA，10,000rpm瞬時離心30秒，將各反應管放入PCR儀器的反應槽內，在PCR儀上進行以下循環：42℃ 30分鐘后98℃5分鐘滅活逆轉錄酶。
3．PCR擴增
12345678
AIV-UAIV-H5AIV-H7AIV-H9AIV-UAIV-H5AIV-H7AIV-H9
備注：每排管蓋標記處為1，每排共8管可檢測2個樣品，每盒5排共可檢測10個樣品。
取出AIV-反應管，加入處理后樣品(或陰性質控品、AIV陽性質控品)3μl，10,000rpm瞬時離心30s。做好標記，置PCR反應槽內，設置反應體積(30μl)、按照下列條件擴增，94℃ 2min，93℃ 30s→58℃ 30s→72℃ 30s ，共35個循環。
4．電泳檢測
4.1 2%瓊脂糖凝膠配制：稀釋50×TAE（或5×TBE）至1×TAE(取20ml50×TAE，加980 ml雙蒸水至1L)，稱4g瓊脂糖放于500mL 錐形瓶中，1×TAE 200 ml,置入微波爐中加熱熔解(避免加熱沸騰溶液外溢)，再加入20μl 溴化乙錠(EB)充分混勻。在電泳槽內放好梳子，倒入瓊脂糖凝膠，待凝固后使用。
4.2 電泳檢測：直接取PCR 擴增產物15μl，用加樣槍點樣于瓊脂糖凝膠孔中，以5V/cm 電壓，1×TAE中電泳，紫外燈下觀察結果。
