細胞:HBSMC細胞
中文名稱:人支氣管平滑肌細胞
生長特性:貼壁
培養基:SMCM
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
HBSMC細胞傳代:
1):細胞密度約80%時,吸出原培養瓶中的培養基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意根據實際情況,把握消化時間)。
2):鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處,即可肉眼可見細胞層脫落,或吹打后鏡下觀察吹打處,即消化完成,否則繼續消化)直接吸掉yi酶,加3~4ml 培養基,輕輕吹打細胞層,把細胞層吹落,吹散。
3):取部分細胞懸液轉移到新的培養皿中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4):注意培養基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。
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基因分型(AIV)核酸檢測 結果判斷
1.1 陰性質控品無帶出現(引物帶除外),若AIV-U未出現擴增帶,為病毒陰性。
1.2 若被檢樣品AIV-U出現229bp 擴增帶,同時AIV-H5出現380bp擴增帶,為病毒H5型陽性。
1.3 若被檢樣品AIV-U出現229bp擴增帶,同時AIV-H7出現162bp擴增帶,為病毒H7型陽性。
1.4 若被檢樣品AIV-U出現229bp 擴增帶,同時AIV-H9出現122bp擴增帶,為病毒H9型陽性。
1.5 若被檢樣品AIV-U出現229bp 擴增帶,同時其他未有擴增帶,為病毒其他型感染。
1.6 用戶可根據需要判斷是否為混合感染。
基因分型(AIV)核酸檢測 質控標準
陰性質控品:沒有目的條帶(引物帶除外),全部陰性。
AIV-U-陽性質控品,AIV-U-陽性質控品出現目的條帶(229bp)。
AIV-H5-陽性質控品,AIV-H5-陽性質控品出現目的條帶(380bp)。
AIV-H7-陽性質控品,AIV-H7陽性質控品出現目的條帶(162bp)。
AIV-H9-陽性質控品,AIV-H9-陽性質控品出現目的條帶(122bp)。
以上條件應該同時滿足,否則,此次試驗視為無效。