細胞:H1437細胞
中文名稱:人肺腺癌細胞
生長特性:貼壁
培養基:1640培養基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
H1437細胞傳代:
1):細胞密度約80%時,吸出原培養瓶中的培養基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意根據實際情況,把握消化時間)。
2):鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時;
(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處,即可肉眼可見細胞層脫落,或吹打后鏡下觀察吹打處,即消化完成,否則繼續消化)
直接吸掉yi酶,加3~4ml 培養基,輕輕吹打細胞層,把細胞層吹落,吹散。
3):取部分細胞懸液轉移到新的培養皿中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4):注意培養基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。
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非洲豬瘟病毒(ASFV)核酸檢測(PCR-熒光探針法)
實驗目的:適用于檢測豬血清、肺、脾、腎、腸系膜及額下淋巴結等組織標本或病毒培養液中非洲豬瘟病毒(ASFV)DNA,適用于豬瘟病毒感染的輔助診斷及流行病學調查。其檢測結果僅供參考。
實驗原理:用一對非洲豬瘟病毒(ASFV)特異性引物和一條特異性熒光探針,應用堿裂解法裂解提取DNA,后者在Taq酶作用下,配以FQ-Buffer(內含Mg2+、Tris-HCl等)、四種核苷酸單體(dNTPs)等成分;
通過PCR-熒光探針法對非洲豬瘟病毒(ASFV)DNA進行擴增,從而達到實時快速定量檢測之目的。
實驗試劑:
(核酸提取液B 4管 500μl/管)(Taq酶系1管 80μl/管)(ASFV –PCR MIX1管 960μl/管)
(ASFV陽性質控品1管 50μl/管(1×10P7PCopies/ml))(陰性質控品 1管 500μl/管)
實驗標本類型:豬血清、肺、脾、腎、腸系膜及額下淋巴結等組織標本或病毒培養液等。