細胞:H1573細胞
中文名稱:人肺腺癌細胞
生長特性:貼壁
培養基:DMEM-H培養基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
H1573細胞傳代:
1):細胞密度約80%時,吸出原培養瓶中的培養基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意根據實際情況,把握消化時間)。
2):鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時;
(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處,即可肉眼可見細胞層脫落,或吹打后鏡下觀察吹打處,即消化完成,否則繼續消化)
直接吸掉yi酶,加3~4ml 培養基,輕輕吹打細胞層,把細胞層吹落,吹散。
3):取部分細胞懸液轉移到新的培養皿中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4):注意培養基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。
(網絡信息主針對網絡推廣作用,僅供參考,細胞培養請咨詢細胞庫管理員,以細胞庫管理員提供給您的信息為準,操作前,如果有不明白之處,先咨詢細胞庫管理員,避免不必要的損失;)
非洲豬瘟病毒(ASFV)核酸檢測
實驗標本采集:
豬肺、脾、腎、腸系膜及額下淋巴結等組織:采集可疑病死豬或捕殺病豬疑似組織約1g左右,置入1.5ml潔凈EP管,立即送檢。
血清:
用一次性無菌注射器抽取受檢豬耳靜脈或者前腔靜脈靜脈血2-5ml,靜置斜放待血清析出, 1,0000rpm離心3分鐘,可取上清立即用于測試;
或吸取上部血清(約500µl)轉入無菌1.5ml Eppendoff管,立即送檢。
細胞保存和運輸:上述標本短期內可保存于-20℃,長期保存可置-70℃。但不能超過6個月,標本運送應采用0℃冰壺。
樣品處理:
血清或病毒液:取液體標本約50μl,轉至1.5ml潔凈離心管中,加50μl核酸提取液B充分混勻(提取液用前需室溫溶解并充分混勻)后100℃10分鐘,13,000rpm離心3分鐘,取上清液3μl進行PCR擴增。
肺、脾、腎、腸系膜及額下淋巴結等固體組織:
取約200mg固體組織,用生理鹽水洗凈表面殘余血液,轉至研磨器中,加1ml生理鹽水,研磨成組織勻漿,取50μl組織勻漿液轉至1.5ml潔凈的離心管中,加50μl核酸提取液B(內含不溶物質,用前需室溫溶解并充分混勻),充分混勻,100℃裂解10min,4℃13,000g離心3min,取上清液3μl進行PCR擴增。