細胞:HBEpiC細胞
中文名稱:人支氣管上皮細胞
生長特性:貼壁
培養基:MEM培養基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
收到細胞后請盡快更換配套培養基,或自己配置的新鮮培養基(含15%血清),如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基,請在原瓶培養基中額外添加10%的血清(原瓶培養基的繼續使用時間最長不宜超過72小時)。
HBEpiC細胞傳代:
1):細胞密度約80%時,吸出原培養瓶中的培養基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意根據實際情況,把握消化時間)。
2):鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時;
(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處,即可肉眼可見細胞層脫落,或吹打后鏡下觀察吹打處,即消化完成,否則繼續消化)
直接吸掉yi酶,加3~4ml 培養基,輕輕吹打細胞層,把細胞層吹落,吹散。
3):取部分細胞懸液轉移到新的培養皿中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4):注意培養基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。
(網絡信息主針對網絡推廣作用,僅供參考,細胞培養請咨詢細胞庫管理員,以細胞庫管理員提供給您的信息為準,操作前,如果有不明白之處,先咨詢細胞庫管理員,避免不必要的損失;)
巴貝斯蟲(BBS)核酸檢測結果分析判定:
反應結束后保存檢測數據文件。根據分析后圖像調節baseline的start值(3~8),stop值(13~18)以及Threshold值,使Std curve 窗口下的標準曲線達到最佳(correlation數值介于-0.97~-1之間,correlation數值等同于∣r∣值),最后到Reporter窗口下記錄儀器自動分析計算出的未知標本數值(Qty-Copies/ml)。
質控標準:
陰性質控品:全部陰性。沒有熒光值增長。
BBS -陽性質控品:陽性質控品的 Ct 值均應小于 35.0。
∣r∣≥0.97(correlation數值介于-0.97~-1之間,correlation數值等同于∣r∣值)。
以上條件應同時滿足 ,否則,此次試驗視為無效,全部試驗應重新進行。
結果判定:
測定結果的計算:
如果Ct值﹤38,則實驗樣品的BBS DNA含量(基因拷貝數/ml)=Qty-Copies/ml;
如果38﹤Ct值﹤40,為灰區建議重新檢測,重新檢測若38﹤Ct值﹤40判為陽性,否則為陰性。
如果Ct值=40,則BBS -DNA含量(基因拷貝數/ml)﹤1×10P2PCopies/ml (低于檢測下限)。