細胞：HCV-29細胞
中文名稱：人膀胱上皮細胞
生長特性：貼壁
培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基 血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）
凍存條件：50%基礎培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
收到細胞后請盡快更換配套培養(yǎng)基，或自己配置的新鮮培養(yǎng)基（含15%血清），如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間最長不宜超過72小時）。
HCV-29細胞傳代：
1）：細胞密度約80%時，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞（注意根據(jù)實際情況，把握消化時間）。
2）：鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時；
（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處，即可肉眼可見細胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）
直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，把細胞層吹落，吹散。
3）：取部分細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當?shù)呐囵B(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4）：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。
（網(wǎng)絡信息主針對網(wǎng)絡推廣作用，僅供參考，細胞培養(yǎng)請咨詢細胞庫管理員，以細胞庫管理員提供給您的信息為準，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細胞庫管理員，避免不必要的損失；）
牛流行熱病毒(BEFV)核酸檢測 標本采集、保存和運輸
適用標本類型：發(fā)病動物血液、呼吸道分泌物試子及組織臟器(肺臟及淋巴結等) 或病毒培養(yǎng)液。
標本采集：
1）血清：用一次性注射器取靜脈血2-3ml，轉至5ml的干燥管中，密閉送檢。
2）呼吸道分泌物試子：用棉試子取咽或泄殖腔分泌物，置入1ml含有1.0ml PBS(或生理鹽水)的離心管中，立即送檢。
3）組織臟器：取發(fā)病動物肺臟及淋巴結等組織約1g，置一1.5ml的潔凈離心管中，密閉送檢。
3. 保存和運輸：上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃。但不能超過6個月，標本運送應采用0℃冰壺。
適用儀器：主要包括ABI GeneAmp PCR System7700、ABI GeneAmp PCR System7500、ABI PRISM 7300、LightCycler等毛細管的儀器，MJ Opticon系列或取得資格認證的定量PCR儀。
質(zhì)控標準：
陰性質(zhì)控品：沒有熒光值增長，全部陰性。
BEFV-陽性質(zhì)控品：陽性質(zhì)控品的 Ct 值均應小于30.0。
以上條件應同時滿足 ，否則，此次試驗視為無效，全部試驗應重新進行。
