細胞：801-D細胞

中文名稱：人大細胞肺癌細胞

生長特性：貼壁

培養基：1640 培養基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO

收到細胞后請盡快更換配套培養基，或自己配置的新鮮培養基（含15%血清），如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基，請在原瓶培養基中額外添加10%的血清（原瓶培養基的繼續使用時間最長不宜超過72小時）。

801-D細胞傳代：

1）：細胞密度約80%時，吸出原培養瓶中的培養基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞（注意根據實際情況，把握消化時間）。

2）：鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時；

（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處，即可肉眼可見細胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養基，輕輕吹打細胞層，把細胞層吹落，吹散。

3）：取部分細胞懸液轉移到新的培養皿中，添加適當的培養基，把細胞懸液打勻，于培養箱中培養。

4）：注意培養基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。

（網絡信息主針對網絡推廣作用，僅供參考，細胞培養請咨詢細胞庫管理員，以細胞庫管理員提供給您的信息為準，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細胞庫管理員，避免不必要的損失；）

牛結核桿菌(BTB)核酸檢測：

適用儀器：主要包括ABI GeneAmp PCR System7700、ABI GeneAmp PCR System7500、ABI PRISM 7300、LightCycler等毛細管的儀器，MJ Opticon系列或取得資格認證的定量PCR儀。

核酸提取

1.1 外周血淋巴細胞 (用戶亦可用淋巴細胞分離液分離淋巴細胞)

1.1.1將抗凝血搖勻，取500μl轉至一潔凈的1.5ml 離心管中，編號標記。

1.1.2 加入1ml 1×紅細胞裂解液(RCLB,試劑盒配備10×RCLB，使用前請用雙蒸餾水按1：9比例配制成1×RCLB)，劇烈震蕩30s，3000g離心5min，棄上清。

1.1.3 重復 1.1.2 兩次至無明顯紅色沉淀。(若沉淀明顯，請再重復步驟1.1.2 一次)。

1.1.4 加入1ml生理鹽水，劇烈震蕩15s，10000g離心5min，棄上清。

1.1.5 沉淀加50μl核酸提取液B(使用前請室溫溶解并充分混勻), 充分混勻。

1.2 痰液：將痰液充分混勻，取0.5ml轉至1.5ml干凈離心管，加入1ml 4%NaOH，充分混勻，室溫放置10min，13,000rpm離心5分鐘，棄上清，沉淀加50μl核酸提取液B，充分混勻。

1.3 肺臟、淋巴結等固體組織：取約200mg組織，加入500μl生理鹽水，研磨成組織勻漿，取50μl轉至一潔凈的1.5ml 的離心管中，加50μl核酸提取液B，充分混勻。

1.4 疑似動物乳液：取1ml乳液，轉至一潔凈的1.5ml 的離心管中，13,000rpm離心3分鐘，棄上清，沉淀加50μl核酸提取液B，充分混勻。

以上處理標本最后100℃處理10分鐘，13,000rpm離心5分鐘，取上清液3μl做PCR反應。

陰性質控品：取50μl陰性質控品，加50μl核酸提取液B充分混勻(提取液用前需室溫溶解并充分混勻)后100℃10分鐘，13,000rpm離心3分鐘，取上清液4μl做PCR反應。

BTB-陽性質控品：直接取4μl進行PCR擴增，或按照PCR擴增介紹方法進行定量分析。