細胞:EOMA細胞
中文名稱:小鼠血管瘤細胞
生長特性:貼壁
培養基:1640 培養基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
收到細胞后請盡快更換配套培養基,或自己配置的新鮮培養基(含15%血清),如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基,請在原瓶培養基中額外添加10%的血清(原瓶培養基的繼續使用時間最長不宜超過72小時)。
EOMA細胞傳代:
1):細胞密度約80%時,吸出原培養瓶中的培養基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意根據實際情況,把握消化時間)。
2):鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時;
(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處,即可肉眼可見細胞層脫落,或吹打后鏡下觀察吹打處,即消化完成,否則繼續消化)
直接吸掉yi酶,加3~4ml 培養基,輕輕吹打細胞層,把細胞層吹落,吹散。
3):取部分細胞懸液轉移到新的培養皿中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4):注意培養基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。
(網絡信息主針對網絡推廣作用,僅供參考,細胞培養請咨詢細胞庫管理員,以細胞庫管理員提供給您的信息為準,操作前,如果有不明白之處,先咨詢細胞庫管理員,避免不必要的損失;)
犬細小病毒(CPV)標本采集:
適用標本類型:狗、貉、狐狗、貉等動物唾液、嘔吐物、糞便、血清或病毒液或者病死動物心、腸等實質臟器標本。
標本采集:
固體組織:無菌條件下取病死動物腸、心或淋巴結或其他組織等100mg左右,置入1.5ml潔凈EP管,立即送檢。
血清:用一次性無菌注射器抽取受檢動物靜脈血2-5ml,靜置斜放待血清析出, 1,0000rpm離心3分鐘,可取上清立即用于測試;或吸取上部血清(約200µl)轉入無菌1.5ml Eppendoff管,保存待檢。
糞便或嘔吐物:無菌條件下取發病動物糞便或嘔吐物等1g左右,置入含有1ml生理鹽水的5ml潔凈離心管中,立即送檢。
實驗儀器:主要包括ABI GeneAmp PCR System7700、ABI GeneAmp PCR System7500、ABI PRISM 7300、LightCycler等毛細管的儀器,MJ Opticon系列或取得資格認證的定量PCR儀。
【結果判定】
測定結果的計算:
如果Ct值﹤38,則實驗樣品的CPV DNA含量(基因拷貝數/ml)= Qty-Copies/ml;
如果38﹤Ct值﹤40,為灰區建議重新檢測,重新檢測若38﹤Ct值﹤40判為陽性,否則為陰性。
如果Ct值=40,則CPV DNA含量(基因拷貝數/ml)﹤1×10P2PCopies/ml (低于檢測下限)。