細胞：VCAP細胞

中文名稱：人前列腺癌細胞

生長特性：貼壁

培養(yǎng)基：1640 培養(yǎng)基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

收到細胞后請盡快更換配套培養(yǎng)基，或自己配置的新鮮培養(yǎng)基（含15%血清），如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間最長不宜超過72小時）。

VCAP細胞傳代：

1）：細胞密度約80%時，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞（注意根據(jù)實際情況，把握消化時間）。

2）：鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時；

（可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處，即可肉眼可見細胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，把細胞層吹落，吹散。

3）：取部分細胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當?shù)呐囵B(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4）：注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。

（網(wǎng)絡信息主針對網(wǎng)絡推廣作用，僅供參考，細胞培養(yǎng)請咨詢細胞庫管理員，以細胞庫管理員提供給您的信息為準，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細胞庫管理員，避免不必要的損失；）

鴨肝炎病毒(DHV)核酸擴增檢測：

實驗目的：

檢測疑似動物(鴨、鵝等水禽)血清、泄殖腔試子(糞便)及組織(肝臟、淋巴結(jié)等)病樣組織標本以及細胞培養(yǎng)液中鴨肝炎病毒(DHV)RNA，適用于鴨肝炎病毒(DHV)感染的輔助診斷及流行病學調(diào)查，其檢測結(jié)果僅供參考。

實驗原理：

選取一對鴨肝炎病毒(DHV)基因保守序列特異性引物和一條特異性熒光探針，應用Trizol提取RNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄酶作用將RNA轉(zhuǎn)錄成cDNA，后者在Taq酶作用下，配以FQ-Buffer(內(nèi)含Mg2+、Tris-HCl等)、四種核苷酸單體（dNTPs）等成分，通過PCR-熒光探針體外擴增法對鴨肝炎病毒(DHV)RNA進行擴增，從而達到實時快速檢測之目的。

實驗組成：

（RNA提取液B 1管 500μl/管）（逆轉(zhuǎn)錄酶系 1管 40μl/管）（Taq酶系 1管40μl/管）

 （DHV-PCR MIX 1管 800μl/管）（DHV陽性質(zhì)控品 1管 50μl/管）（陰性質(zhì)控品 1管 500μl/管）

 （DEPC水 1管 2000μl/管）

備注: RNA提取液A(Trizol Reagents)等另行配備。

結(jié)果分析判定：

反應結(jié)束后，使用手動調(diào)整閾值使陰性質(zhì)控品Ct值在40以上，Ct值小于38個循環(huán)的為陽性；Ct值在38-40個循環(huán)之間，為灰區(qū)，需要進行重復試驗。重復試驗之后，如果Ct值仍然在38-40個循環(huán)之間，判斷為陽性，沒有熒光值增長為陰性。