細胞:NRK-49F細胞
中文名稱:大鼠纖維樣腎細胞
生長特性:貼壁
培養基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
NRK-49F細胞傳代:
1):細胞密度約80%時,吸出原培養瓶中的培養基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意根據實際情況,把握消化時間)。
2):鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時;
(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處,即可肉眼可見細胞層脫落,或吹打后鏡下觀察吹打處,即消化完成,否則繼續消化)
直接吸掉yi酶,加3~4ml 培養基,輕輕吹打細胞層,把細胞層吹落,吹散。
3):取部分細胞懸液轉移到新的培養皿中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4):注意培養基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。
收到細胞后請盡快更換配套培養基,或自己配置的新鮮培養基(含15%血清),如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基,請在原瓶培養基中額外添加10%的血清(原瓶培養基的繼續使用時間最長不宜超過72小時)。
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iPS技術能將體細胞轉變為誘導多能干細胞,有著很大的應用潛力,不僅能加深人們對發育和疾病機制的理解,還可以在此基礎上進行細胞治療。不過需要將動物模型整合到現有方案中,并且定量描述驅動重編程的基本過程。
(人H292細胞 來源:通派細胞庫 人肺癌細胞)(小鼠3T3-L1細胞 來源:通派細胞庫 小鼠胚胎成纖維細胞)
自iPS技術誕生以來,細胞重編程研究如雨后春筍一般涌現出來。不論是基礎研究領域(解析單細胞如何發展成為功能的生物體),還是醫學研究領域(理解疾病機制并進行治療),都對理解和控制iPS過程寄予厚望。
(人ZR-75-1細胞 來源:通派細胞庫 人乳癌細胞)(鼠CHO-K1細胞 來源:通派細胞庫 倉鼠卵巢細胞)
可以這樣描述一個細胞的命運:多能狀態的細胞位于山頂,細胞中的基礎信號網絡就像重力一樣想把細胞拉下山,達到已分化狀態。因此細胞重編程中的挑戰是雙重的:不僅要把已分化的細胞抬上山頂,還要沉默那些吸引細胞分化的因子。
(大鼠SHZ-88細胞 來源:通派細胞庫 大鼠乳癌細胞)(人MDA-MB-453細胞 來源:通派細胞庫 人乳癌細胞)
細胞重編程最初是通過逆轉錄病毒將OSKM引入細胞,不過后來其他組合的轉錄因子也獲得了成功,這說明細胞重編程涉及了復雜的動態過程和狀態轉變。
(人H1299細胞 來源:通派細胞庫 人非小細胞肺癌細胞)(人SW579細胞 來源:通派細胞庫 人甲狀腺鱗癌細胞)
這種方法生成的iPSC存在較高的異質性,會引發細胞突變,重編程效率也比較低。要將iPSC用于臨床,需要考慮避開逆轉錄病毒的其他方法。