細胞:HL細胞
中文名稱:人胚肺二倍體細胞
生長特性:貼壁
培養基:MEM+10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
HL細胞傳代:
1):細胞密度約80%時,吸出原培養瓶中的培養基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意根據實際情況,把握消化時間)。
2):鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時;
(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處,即可肉眼可見細胞層脫落,或吹打后鏡下觀察吹打處,即消化完成,否則繼續消化)
直接吸掉yi酶,加3~4ml 培養基,輕輕吹打細胞層,把細胞層吹落,吹散。
3):取部分細胞懸液轉移到新的培養皿中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4):注意培養基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。
收到細胞后請盡快更換配套培養基,或自己配置的新鮮培養基(含15%血清),如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基,請在原瓶培養基中額外添加10%的血清(原瓶培養基的繼續使用時間最長不宜超過72小時)。
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多數細胞不能分裂,除非有足夠的氧氣存在以支持它們的后代,但是某些癌細胞和其他細胞類型規避了這個規則。【人KHM-5M 來源:通派細胞庫 人未分化甲狀腺乳狀癌細胞】研究人員鑒定出廢除細胞警告信號的機制,使得癌細胞能夠繼續分裂即使在沒有強大的血液供給條件下。
在這個過程中,研究人員發現溶酶體——細胞的蛋白質‘重復利用中心’——幫助控制細胞分裂的決定。【人Daoy 來源:通派細胞庫 人髓母細胞瘤細胞】還發現了新的證據表明某些藥物能夠停止腫瘤的生長,具有高水平的蛋白HIF-1α。
低水平氧氣促進HIF-1α的產生與活化,它以兩種方式保護細胞。它開啟一些基因產生蛋白幫助細胞適應氧氣不足。【人CAL-62 來源:通派細胞庫 人甲狀腺未分化癌細胞】它也能停止DNA復制,防止細胞分裂并增加更多需氧細胞到一個已經很惡劣的環境中。
了解某些細胞忽略HIF-1α的警告并且繼續分裂,團隊尋找HIF-1α與Cdk1、Cdk2之間的關系,【人BHT101 來源:通派細胞庫 人未分化甲狀腺乳狀癌細胞】這一蛋白已知調節細胞分裂的決定。發現HIF-1α與兩者可以相互作用,但是Cdk1增加HIF-1α水平,而Cdk2減低HIF-1α水平。
懷疑Cdk1與Cdk2按照HIF-1α的指示行事通過細胞的微型“垃圾處理器”稱為蛋白酶體標記或者不標記毀滅。【人B-CPAP 來源:通派細胞庫 人甲狀腺乳狀癌細胞】但研究人員限制蛋白酶體的功能后,他們發現并沒有改變HIF-1α的水平。相反,結果證明是Cdk1與Cdk2通過細胞的溶酶體標記或者不標記毀滅改變了HIF-1α水平。
值得注意的是,在某些腫瘤細胞中,【人8305C 來源:通派細胞庫 人甲狀腺未分化癌細胞】Cdk2能夠增加HIF-1α的水平同時也刺激其基因激活作用。有效效應是細胞連續分裂同時應付低氧水平。在培養的細胞中,藥物抑制Cdk1以防止HIF-1α水平的下降,并且恢復停止細胞分裂的能力,揭示它們也許能有效治療某些腫瘤。