細胞:RPMI2650細胞
中文名稱:人鼻腔上皮細胞
生長特性:貼壁細胞
RPMI2650細胞培養基:1640 培養基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
收到細胞后請盡快更換配套培養基,或自己配置的新鮮培養基(含15%血清),如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基,請在原瓶培養基中額外添加10%的血清(原瓶培養基的繼續使用時間最長不宜超過72小時)。
RPMI2650細胞傳代:
1):細胞密度約80%時,吸出原培養瓶中的培養基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意根據實際情況,把握消化時間)。
2):鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時;
(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處,即可肉眼可見細胞層脫落,或吹打后鏡下觀察吹打處,即消化完成,否則繼續消化)
直接吸掉yi酶,加3~4ml 培養基,輕輕吹打細胞層,把細胞層吹落,吹散。
3):取部分細胞懸液轉移到新的培養皿中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4):注意培養基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。
(網絡信息主針對網絡推廣作用,僅供參考,細胞培養請咨詢細胞庫管理員,以細胞庫管理員提供給您的信息為準,操作前,如果有不明白之處,先咨詢細胞庫管理員,避免不必要的損失;)
雞特定基因序列(Chiken)核酸擴增檢測:
1.DNA提取(用戶可根據需要選擇商業化DNA提取試劑盒,如Qiagen DNA提取試劑盒)
1.1動物組織、食品或飼料:直接取約50mg上述材料,置入潔凈的1.5ml離心管中,加50μl核酸提取液B 充分混勻(提取液用前需室溫溶解并充分混勻)后100℃10分鐘,13,000rpm離心3分鐘,取上清液3μl做PCR反應。
1.2血液:取約0.5ml抗凝血轉至一潔凈的1.5ml EP管中,加1ml 紅細胞裂解液(1×RCLB,使用前請按照1:9稀釋10×RCLB),劇烈震蕩裂解30s,3,000rpm離心5min,棄上清,重復裂解2次,最后加1ml生理鹽水洗滌一次,5,000rpm離心3min,棄上清,沉淀加50μl核酸提取液B充分混勻(提取液用前需室溫溶解并充分混勻)后100℃10分鐘,13,000rpm離心3分鐘,取上清液3μl做PCR反應。
2.PCR擴增
取單管單份Chiken PCR反應管,加入處理后的樣品(或陰性質控品、Chiken -陽性質控品)3μl,10,000rpm瞬時離心30s。將各反應管做好標記,置入PCR反應槽內,設置反應體積(30μl),按照下列條件擴增:
循環條件: 94℃變性2min,后93℃ 30s→58℃ 30s→72℃ 30s ,共35個循環。