細(xì)胞:RT-112細(xì)胞
中文名稱:人膀胱癌細(xì)胞
生長特性:貼壁細(xì)胞
RT-112細(xì)胞培養(yǎng)基:1640 培養(yǎng)基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
收到細(xì)胞后請盡快更換配套培養(yǎng)基,或自己配置的新鮮培養(yǎng)基(含15%血清),如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基,請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加10%的血清(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間最長不宜超過72小時)。
RT-112細(xì)胞傳代:
1):細(xì)胞密度約80%時,吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次,加2~3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意根據(jù)實(shí)際情況,把握消化時間)。
2):鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動時;
(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細(xì)胞層某處,即可肉眼可見細(xì)胞層脫落,或吹打后鏡下觀察吹打處,即消化完成,否則繼續(xù)消化)
直接吸掉yi酶,加3~4ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,把細(xì)胞層吹落,吹散。
3):取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4):注意培養(yǎng)基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項操作或者凍存。
(網(wǎng)絡(luò)信息主針對網(wǎng)絡(luò)推廣作用,僅供參考,細(xì)胞培養(yǎng)請咨詢細(xì)胞庫管理員,以細(xì)胞庫管理員提供給您的信息為準(zhǔn),操作前,如果有不明白之處,先咨詢細(xì)胞庫管理員,避免不必要的損失;)
雞特定基因序列(Chiken)核酸擴(kuò)增檢測:
電泳檢測
1 2%瓊脂糖凝膠配制:稀釋50×TAE至1×TAE(取20ml50×TAE,加980 ml雙蒸水至1L),稱4g瓊脂糖放于500mL 錐形瓶中,1×TAE 200 ml,置入微波爐中加熱熔解(避免加熱沸騰溶液外溢),再加入20μl 溴化乙錠(EB)充分混勻。在電泳槽內(nèi)放好梳子,倒入瓊脂糖凝膠,待凝固后使用。
2 電泳檢測:直接取PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物15μl,用加樣槍點(diǎn)樣于瓊脂糖凝膠孔中,以5V/cm 電壓,1×TAE中電泳,紫外燈下觀察結(jié)果。
雞特定基因序列(Chiken)核酸擴(kuò)增檢測結(jié)果判斷:
陰性質(zhì)控品無帶出現(xiàn)(引物帶除外),Chiken -陽性質(zhì)控品出現(xiàn)211bp 擴(kuò)增帶,若被檢樣品出現(xiàn)211bp 擴(kuò)增帶為含有雞源性成分,否則為陰性。
【質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)】
陰性質(zhì)控品:沒有目的條帶,全部陰性。
Chiken -陽性質(zhì)控品:出現(xiàn)目的條帶(211bp)。
以上兩個條件應(yīng)該同時滿足,否則,此次試驗視為無效。